描述

ZeroBlunt®TOPO®PCR克隆试剂盒提供高效的5分钟一步克隆策略（“TOPO®克隆”），用于将校正热稳定聚合酶扩增的平端PCR产物直接插入质粒载体中。每个试剂盒都含有用于阳性选择的含有ccd B基因的ZeroBlunt®TOPO®载体（见图），仅允许具有重组体的质粒载体生长。Zero®Blunt®TOPO®试剂盒可根据您的需求和预算，提供各种感受态细胞或不含感受态细胞。Zero®Blunt®TOPO®PCR克隆试剂盒的特点：

快速简便 - 只需3个步骤即可从PCR到克隆，只需5分钟的手动操作时间 - 
高效 -通过正确的插入获得高达95％的克隆经过十多年的引用
证明 -可靠的性能超过4,000次引用
简单 -无需连接酶，PCR后程序或含有特定序列的PCR引物。

ZeroBlunt®TOPO®克隆试剂盒 - 概述

载体： pCR™Blunt II-TOPO®载体 - 含有ccd B基因，可直接选择重组体

克隆方法： TOPO®克隆 - 拓扑异构酶I基，5分钟钝化连接用校正热稳定聚合酶扩增的PCR产物

感受态细胞：多种选择 - 从具有通用，高效，噬菌体T1抗性，快速生长的感受态细胞的试剂盒中选择，或使用您自己的。

的pCR™钝II-TOPO®矢量设计为校正活性的聚合酶
在PCR™钝II-TOPO？载体是设计用来克隆通过热稳定的校正活性的聚合酶如产生的Platinum®平端PCR产物的Pfx DNA聚合酶。pCR™Blunt II-TOPO®载体包含：

•位于PCR产物插入位点侧翼的EcoRI位点，可轻松切除插入物
•卡那霉素和Zeocin™抗性基因可供您选择在大肠杆菌中选择
•SP6启动子/引物位点用于体外 RNA转录和测序
•用于测序或PCR筛选的M13正向和反向引物位点

pCR™Blunt II-TOPO®克隆选择
pCR TM -Blunt II-TOPO允许通过破坏致死的大肠杆菌基因ccd B 直接选择重组体。载体含有与LacZα片段的C末端融合的ccd B基因。平末端PCR产物的连接破坏了LacZα- ccd B基因融合体的表达，允许转化后仅阳性重组体的生长。含有非重组载体的细胞在接种后被杀死。因此，不需要蓝/白筛选。

简化的基于TOPO®的克隆
使用TOPO®克隆技术，不需要含有特定序列的PCR引物，PCR后程序，载体制备或其他时间密集的DNA操作步骤。只需将PCR反应直接添加到提供的拓扑异构酶电荷载体中，孵育5分钟，转化大肠杆菌感受态细胞。

高效克隆
高达95％的克隆携带所需的插入物，您可以筛选更少的克隆，节省您的时间和金钱。该试剂盒中使用的pCR™Blunt II-TOPO®载体含有致死的ccd B基因，可有效选择由热稳定校正聚合酶产生的平端PCR重组产物。

克隆的标准
在克隆方面，TOPO®克隆技术十多年来一直是数千名科学家的可靠合作伙伴。TOPO®克隆快速，简单易用且高效，已应用于许多不同的载体，适用于各种应用。

ZeroBlunt®TOPO®PCRCloning®试剂盒选项
用于将平端PCR产物直接插入质粒载体的ZeroBlunt®TOPO®PCR克隆试剂盒可与各种感受态细胞一起购买，根据您的需要提供不同的优势：

一般克隆：*0细胞（目录号K2800-20，K2800-40）
高效克隆：*0 Electrocomp™细胞（目录号K2860-01，K2860-40）
一般克隆，噬菌体T1抗性：DH5α-T1R （货号：K2820-20，K2820-40）
快速增长：Mach1™-T1R具有化学竞争力的大肠杆菌（目录号K2830-20）
提供您自己的产品：灵活性和省钱（目录号450254）

我们还提供包含PureLink的套件版本®快速质粒微量制备试剂盒（目录号K2800-02），用于分离干净，可测序的重组质粒