基因组DNA抽提
时间：2010-12-09 阅读：1034
. 基因组DNA降解
（1）样品不新鲜：虽然DNA在分子结构上较RNA稳定，但样品在分离后细胞内的DNA酶同样会作用于DNA分子。
（2）样品本身富含DNA酶；
2. 得率低或无基因组DNA
（1）DNA未充分释放：在分离到的相间沉淀中加Buffer G-A后未充分振荡释放DNA。
（2）Buffer W2中未加入无水乙醇：未加乙醇的Buffer W2是一种低盐溶液，可溶解DNA。若直接用于洗涤DNA-prep Tube将会溶解并去除结合在silica膜上的DNA。
（3）DNA未充分洗脱：用于洗脱DNA的Eluent或去离子水应在使用前预热至65℃，其体积不应小于60 μl。
3. RNA污染
在Buffer R-C分相后分离相间沉淀的时，未将下相（含RNA）*去除。
4. 生物学活性差
（1）DNA中盐分含量高：Buffer W1含高浓度盐离子，后续的Buffer W2洗涤是为去除盐分设计的。操作时按说明书的参数用Buffer W2洗涤DNA-prep Tube。
（2）DNA中含乙醇：使用前用户已在Buffer W2中加入乙醇，若洗涤时不严格按照说明书提供的实验参数进行操作可能会有乙醇残留在silica膜上。
出现问题的原因分析及解决方法
| 可能出现的问题 | 可能原因 | 建议 |
| 结合柱阻塞 | 残留细胞碎片 | 沉淀之后，确保无原材料颗粒一起被转移。 |
| 在把试样转移至结合柱上时，DNA团还没有*溶解 | 在加入乙醇之前，确保DNA已经*溶解。这可能需要再次在65℃下水浴及旋涡振荡。 | |
| 样品太黏滞 | 起始原料的量不要超过建议量,或者增加试剂量,并且每个样品用2个个或以上的结合柱。 | |
| 沉淀不* | 沉淀后，增加离心的转速或时间。 | |
| 低DNA量 | 原材料没有充分研碎 | 无论是干的样品还是新鲜样品，在加入Buffer P1之前，均要把它们制成均匀的粉粒。 |
| 组织细胞溶解不好 | 减少原材料的量，或增加试剂的量。 | |
| DNA仍然结合在结合柱上 | 把洗脱液的体积增加到200μl，并在离心之前把整个包着柱的离心管在65℃下水浴5min。 | |
| DNA被洗掉了 | 在洗涤之前，加入适当体积的无水乙醇以冲稀Wash Buffer的浓度。 | |
| 以后的应用中出现的问题 | 残留盐 | Wash Buffer必须在室温下保存。 |
| 残留乙醇 | 在第二次离心洗涤后，确保结合柱在极速离心2min的情况下已经干了。 |