以毛细管转移方式进行北方转印实验
时间：2010-12-30 阅读：639
要进行北方杂合反应前，必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸（nitrocellulose membrane） 或尼龙膜 （nylon membrane） 上，这一个过程称为转印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛细管转移法 （capillary transfer）、真空转移法 （vacuum transfer） 与电转印法 （electroblotting）。 毛细管转移法借助吸水纸吸收转移缓冲液时所产生的牵引力量将RNA自洋菜胶体转移至膜上；要转印*，起码需要作用6 h以上。 虽然所需花费的时间比较长，以其不须要特别的仪器设备，毛细管转移法目前仍被普遍采用。 若分析RNA时采用变性聚丙烯酰胺胶体电泳，则必须以电转印法进行RNA转印。至于膜的选择，硝基纤维素膜的优点是比较不会产生非专一性反应；不过其一旦被润湿再烘干的后，容易碎裂，不适用于进行多次杂合反应。 尼龙膜的优点是韧性好，与核酸结合的能力也相当强，正可以弥补硝基纤维素膜的缺点，现已成为主流。 一旦将RNA转移至膜上后，即可以利用紫外线照射法 （uv irradiation） 或真空干燥法 （在真空下80℃加热2 h） 将其固定于转印膜上。
仪器用具：塑料盒；玻璃板；裁纸刀
药品试剂：20×SSC （3 M NaCl, 300 mM sodium citrate）；尼龙膜；3MM 滤纸；吸水纸；dH2O/DEPC
方法步骤：
1） 将甲醛洋菜胶体移放在塑料盒内，以dH2O/DEPC冲洗数次，以便去除甲醛。
注意：在移动胶体时请特别留心，不要把胶体弄破了！
2） 注入100 mL 20×SSC，静置5 min。
3） 根据图所示，依序在塑料盒上堆栈玻璃板、滤纸 （作为盐桥）、电泳胶、尼龙膜、三层滤纸、与吸水纸，以便以毛细管转移方式将RNA 转印于尼龙膜上；塑料盒内装入适量20×SSC，以便作为转移缓冲液。
以毛细管转移法进行核酸转印
注意：
a. 滤纸与尼龙膜应先以20×SSC 润湿，再用于堆栈。
b. 在滤纸、尼龙膜、与电泳胶夹层间可能会有气泡存在，因此在放好电泳胶、尼龙膜或滤纸后，应立即检视，并以食指轻轻平移的方式小心赶走气泡。
c. 此转印步骤将持续至隔天才结束。