[器材和试剂]

● PBBST（PBS，0．1％BSA，0．1％Tween-20）

● 磁分离仪（Dynal）

● f1Rl紫外灭活噬菌体

● 洗脱缓冲液（用甘氨酸将0．1mol/L HCl调整到pH 2．2，1mg/mlBSA）

● 2rn01/L Tris-HCl pH 9．0

● LB-琼脂培养基（1％细菌用胰蛋白胨，0．5％酵母提取物，1．5％细菌用琼脂，0．17Trl01/L NaCl，pH 7．2）

● LB-琼脂培养基+Amp/X-gal/IPTG[LB-琼脂培养基，50/xg/m1青霉素，35ug/ml X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚β-D-半乳糖苷），35p．g/m11PTG（异丙基硫代半乳糖苷）]

 

[方法]

1．将已包被的磁珠转移到Eppendorf管中，加入50ul血清样品PBBST液，zui后定容至1m1。4℃转轮孵育12～16小时。

2．在4℃下，用PBBST洗涤磁珠4次，每次30分钟；每次洗涤10ml。

3．再次将磁珠悬浮在PBBST中， 内含1×10¹³个UV灭活nRl，终体积为1ml。4℃置于转轮上3～4小时。

4．在上述混合物中加入2X10”个文库噬菌体颗粒，4℃温和搅动12～16小时。

5．在4℃下，用10m1PBBST洗涤磁珠6～7次，除去未连接的噬菌体；每次洗涤后，用磁分离仪除去液体。

6．室温下，用0．5ml洗脱缓冲液温和搅动孵育磁珠30分钟，洗脱结合噬菌体。

7．将洗脱产物转移到一个Eppendorf管中，再加入50ul的2rll01/L Tris-HCl，pH 9．0，中和。

8．在LB-琼脂培养基+Amp/X-gal/IPTG平板上，按转导单位（TU）滴定洗脱噬菌体（A）和未吸附噬菌体（N）。