SOLARBIO/索莱宝 品牌
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产品简介:
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌细胞壁较厚,肽聚糖网层次较多且交联致密,乙醇脱色时,肽聚糖脱水使孔径缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上,呈紫色。革兰氏阴性菌细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,脱色后类脂外膜迅速溶解,缝隙加大,结晶紫与碘复合物溶出,因此乙醇脱色后再经番红复染,呈红色。
操作步骤:
1. 涂片固定
菌液涂片时不可过于浓厚,干燥、固定。固定时通过火焰 1-2 次即可,不可过热,以载玻片不烫手为宜。
2. 染色
一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是:
(1)加上结晶紫后,染色 1 分钟,水洗。
(2)加上碘液后染色 1 分钟,水洗。
(3)加上 95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约 20-60 秒,水洗,吸去水分。
(4)加上蕃红后,染色 1 分钟,水洗。
(5)吸干或在空气中凉干后,油镜镜检。
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度,如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌。此外,菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌体自行溶解,都常呈阴性反应。
3. 结果观察:革兰氏阴性菌呈红色,革兰氏阳性菌呈紫色。以均匀分散开的细菌的革兰氏染色反应为准,过于密集的细菌,常常呈现假阳性。
注意事项:
1.标本涂片不能太厚,严格按操作要求进行。若涂片较厚,应延长脱色时间,直不再出现紫色为止。
2.玻片通过火焰温度不能太高。
3.碘液变透明,则不能使用。
4.水洗时动作要轻柔,沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗,以免把菌体冲掉。
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