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固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。戊二醛固定液会引起蛋白质α-螺旋结构变形,不利于过氧化物酶染色。戊二醛固定液固定速度快,渗透力差。戊二醛固定液(电镜,2.5%)由戊二醛、磷酸盐、去离子水等组成,pH7.2~7.4,该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好,经常用于电镜标本的固定。
Gluta固定液(电镜,2.5) 染色液
Gluta固定液(电镜,2.5) 染色液
固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。Gluta 固定液会引起蛋白质 α-螺旋结构变形,不利于过氧化物酶染色。Gluta 固定液固定速度快,渗透力差。Gluta 固定液的 pH7.2~7.4,该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好,经常用于电镜标本的固定。
实验步骤:
(仅供参考):
1、 根据实验具体要求操作。
2、 取新鲜标本,立即入 Gluta 固定液 4℃固定 1~4h,稍大标本应适当延长固定时间。
3、 送检或 4℃保存。
注意事项:
1、 Gluta 固定液有一定腐蚀性,请在通风较好的环境下小心操作, 避免吸入。
2、 组织取材的厚度不同,固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为 2~4mm,一般不超过 6mm。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
3、 固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于 10:1。如果容积不够大,可以在固定期间更换 1~3 次固定液。
4、 温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但本固定液不要提高温度。
5、 取出新鲜组织后,应及时固定。无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
6、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
参考文献:
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《The ionophore antibiotic gramicidin A inhibits pancreatic cancer stem cells associated with CD47 down-regulation》 作者:Rui-Qi Wang, Jing Geng, Wei-Jin Sheng, Xiu-Jun Liu, Min Jiang and Yong-Su Zhen 期刊:Cancer Cell International 影响因子:3.439 PMID:31139022