BCA  微量蛋白浓度测定试剂盒说明书
货号：PC0050
规格：500 微孔(500T)/1000 微孔(1000T)/2000 微孔（2000T）
保质期：本试剂盒自订购之日起一年内有效。
产品内容：
包装 500  微孔 1000  微孔 2000  微孔 保存
BCA 试剂 100ml 2×100ml 4×100ml 室温
Cu 试剂 3ml 6ml 12ml 室温
PBS 稀释液 30ml 60ml 120ml 室温
BSA 蛋白标准 (5mg/ml BSA) 0.3ml 0.5ml 1ml -20℃
产品简介：
碱性条件下，蛋白将Cu 2+ 还原为Cu + ， Cu + 与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在 562nm处的吸收
值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检
测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释
液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明：
一 . 微孔酶标仪法
1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按 50 体积 BCA 试剂加 1 体积 Cu 试剂（50:1）配制成 BCA
工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。
2. 稀释标准品：先用 PBS 将 BSA 标准品稀释终浓度为 0.8mg/ml 备用。再依次稀释 80、40、20、
10、5、2.5ug/ml.。
3. 高浓度蛋白可将样品作适当稀释（多做几个梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀释） ，由于移液器
在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。
4. 各孔加入 200 微升 BCA 工作液和 40ul 稀释后的蛋白或标准品溶液，对照孔加入 PBS 稀释液。37
℃放置 4 小时。用酶标仪测定 A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时，应注意防止因水
分蒸发影响检测结果。
二 . 分光光度计法
如没有酶标仪，在离心管中混匀样品后加入比色皿，用分光光度计比色。
采用分光光度计测定蛋白浓度方法与酶标仪法相似， 只需要按照分光光度计比色皿容量要求按照比例
配置相应的 BCA 工作液和标准品溶液。
常规比色皿用量为 200ul 有样本加入 1mlBCA 工作液或 400ul 样本加入 2mlBCA 工作液。微量比色皿
用量为 20 样本加入 100ul BCA 工作液。或根据仪器情况自行调整。
附：样本及标准品稀释示意图
样本管号  A  B  C  D  E
PBS 稀释液用量  180  100  100  100  ……
标准品用量  20（原液） 100（从 A 管吸出） 100（从 B 管吸出） 100（从 C 管吸出） ……
终浓度（ug/ml） 80  40  20  10  ……
注意事项：
1. 长期不用时，Cu 试剂与 PBS 稀释液可置于 2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。BCA 试剂在低
温条件下出现结晶沉淀时，可 37℃温育使其*溶解, 不影响使用。
2. 样品中若含有较多干扰物质时，请采用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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