EA14A\\00                     2016-01版

鸡传染性法氏囊病病毒VP2抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）说明书

【产品名称】

通用名称：鸡传染性法氏囊病病毒VP2抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Diagnostic Kit For Antibodies To

Chicken Infectious Bursal Disease Virus VP2（IBDV-VP2 Ab）,ELISA

【规格】

96T×2/盒

【预期用途】

本试剂盒主要目的是测定鸡血清中鸡传染性法氏囊病病毒VP2抗体的相对水平。可用于评估鸡群鸡传染性法氏囊病病毒疫苗免疫状况分析。

【检验原理】

本试剂盒应用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，由包被有高纯度的鸡传染性法氏囊病病毒VP2抗原的微孔反应板、辣根过氧化物酶标记的抗鸡IgG及其它试剂配套组成。其反应机理为包被抗原与样本中的IBDV-VP2-Ab结合，再与酶标抗鸡IgG抗体形成“包被抗原+IBDV-VP2-Ab+酶标抗鸡IgG抗体”复合物，加入显色剂，通过酶催化反应显色。显色深浅与IBDV-VP2-Ab的量成正比，当样本反应显色后，经酶标仪检测所得结果超过设定的临界值时结果判为阳性，即表明免疫产生了抗体或有自然感染存在。

【主要组成成份】

【自备器材】

1．酶标仪，双波长450/630nm滤光片

2．精确的微量移液器（单道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒温箱

4．微量振荡器

5．洗液吸移装置

6．一次性枪头（10ul，200ul）

7．去离子水

【样本要求】

1．本试剂检测的样本为鸡血清，样本应无菌采集，2℃～8℃贮存应不超过一周，长期应在-20℃以下保存。

2．避免使用严重溶血、有沉淀物、含悬浮纤维蛋白及污染长菌及含叠氮钠血清样本。

3．样本中含有常规用量的EDTA、枸橼酸钠或肝素钠等抗凝剂不影响本实验。

【实验准备】

1. 试剂盒组分回温平衡:试剂盒组分在实验前，先取出置室温30min

2．样本稀释：用试剂盒提供的样本稀释液将样本作40倍稀释，稀释的样本混合均匀能取得较好结果。

3．配制洗涤液：将试剂盒所提供浓缩洗涤液量取适量体积直接用去离子水稀释20倍，即可使用。

【检验方法】

1．加样：根据样本数量，取所需板条，检测时，设阴、阳性对照各2孔，分别加入不用稀释的阴、阳性对照血清100μl于相应孔中。其余为样本孔，每孔加100μl用样本稀释液稀释好的样本（可做单孔也可双孔检验）。2．温育：加样后，盖上盖板膜，置37℃温育30分钟。

3．洗板：甩去孔内液体，用洗涤液注满反应板孔，静置10s，直接甩出，洗涤3次，后一次洗涤后吸干板内液体。

4．加酶：每孔加酶标记物100μl。

5．温育：加好酶标记物的反应板盖好盖板膜，置37℃温育30分钟。

6．洗板：同步骤3。

7．显色：每孔加显色剂100μl，振荡混匀，37℃避光反应10分钟。

8．终止：每孔加终止液50μl，振荡10秒，充分混匀，终止后即读数。

9．读数：以450/630nm双波长检测，读取各孔吸光度值（OD值）。

【结果判定】

在酶标仪上测各孔的OD值。检测结果有效的条件是阳性对照孔的平均OD值≥0.6，阴性对照孔的平均OD值必须＜0.15；样品中抗体存在与否，或样本中抗体的相对水平的高低由S/P值决定，S/P值计算时按以下方式处理:

  S/P=(样本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示阴性对照孔平均OD_450/630值，PCx(—)表示阳性对照孔平均OD_450/630值；

当样本的S/P≥0.2时判为阳性；样品S/P值＜0.2时判为阴性。

若进行大量样本检测时，可使用试剂盒专业分析软件进行分析数据结果，该软件可登陆本公司*网站下载。

【检验结果的解释】

1．严重溶血、血清中纤维蛋白分离不充分、含红血球样本可能导致假阳性；长菌的样本可能导致假阴性。

2．因个体差异或免疫时间长短等因素可能会出现个别鸡只免疫疫苗后检测结果为阴性。

3．阳性结果用于感染鸡的血清学诊断以及流行病学调查时需结合其他诊断方法和临床资料进行分析。

【注意事项】

1．本试剂盒仅用于体外诊断。

2．不要使用过期的试剂盒组分，不要把不用批次的组分混合使用。

3．使用试剂盒之前，一定要仔细阅读说明书。

4．本试剂盒应按含有传染性材料对待，试验废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

5．微孔板从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽后方可拆开，未用完的微孔板须放回有干燥剂的铝箔袋并密封2℃-8℃保存。未用完的液体试剂应盖好瓶盖，与其它配套组份放入试剂盒中于2℃-8℃避光保存。

6．若20倍浓缩洗涤液出现结晶，属正常现象，放置37℃至溶解后即可。

7．应用微量移液器加入样本及试剂，并经常校对其准确性。

8．加洗涤液时应做到满而不溢，防止孔口有游离酶不能洗净或各孔间的交叉污染。

9．终止液有腐蚀性，若溅到皮肤或衣物上应立即用大量清水冲洗干净。

【储存条件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷冻，有效期12个月。

【生产日期及批号】

详见包装袋和外包装盒。

法氏囊抗体检测卡

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