高纯硅胶色谱柱的两种在线结合及操作方法介绍
时间:2021-05-24 阅读:761
高纯硅因其优良的机械强度和表面易改性等特征,已成为应用广泛的色谱柱填料。高纯硅胶色谱柱具有柱效高、选择性好及分析速度快等特点,因而被广泛用于分离极性小分子如药物,而用于糖、肽或蛋白质分离较少。
高纯硅胶色谱柱的在线结合目前主要有两种方式:
一种是使用切换阀,将萃取柱和色谱分析柱连接,让色谱流动相把萃取柱上富集的样品全部转移到色谱分析柱(直接方式)。
另一种是间接方式,采用和离线固相萃取一样的净化方式。样品组分收集后,用萃取仪内置的进样器取10-20微升的组分注入色谱分析柱。
二阶在线固相萃取。它先采用间接方式的在线固相萃取作为一阶段的样品净化,组分经过溶剂修饰后再通过直接在线固相萃取进行富集。这种二阶在线固相萃取,先用一阶去除大部分样品的干扰物。所使用的萃取柱和普通的离线固相萃取一样,可以是C18、离子交换、石墨化炭黑、亲和色谱等类型。二阶固相萃取的作用是富集和进一步净化。因为样品已经比较干净,二阶寿命得以延长。
下面要为大家介绍的是高纯硅胶色谱柱的操作方式:
1、在条件允许情况下,在使用前对按照说明书方法进行柱效测试。以确保色谱柱的正常。
2、所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于60℃。
3、样品
将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱,则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物,使用0.5μm或更小粒径的滤膜过滤。样品溶液如果使用强溶剂,为达到较好峰形,需要降低进样量。
4、流动相
所有流动相,特别是含有缓冲盐的流动相,当日实验当日配制;如果使用了前日配制的流动相,请确保流动相pH值没有变化,并确保流动相没有长菌。流动相的pH值取决于您的应用和色谱柱填料类型。
希望上述内容能够帮助大家更好的了解本产品。