因此，在测定ELISA试剂盒样的同时，绘制校准曲线为理想，否则应在测定试样的同时，平行测定零浓度和中等浓度标准溶液各两份，取均值相减后与原校准曲线上的相应点核对，其相对差值根据方法精密度不得大于5%~10%，否则应重新绘制校准曲线。

       ELISA试剂盒校准曲线的绘制: 用一系列被测物标准溶液，按照标准方法规定的步骤，将被测物转变为有色溶液。制备好的标准系列和空白，在方法选定的波长下，测定吸光度。已被测物浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线。1)对标准系列，溶液以纯溶剂为参比进行测量后，应先作空白校正，然后绘制标准曲线;2)标准溶液一般可直接测定，但如试样的预处理较复杂致使污染或损失不可忽略时，应和试样同样处理后再测定。 3)校准曲线的斜率常随环境温度、试剂批号和贮存时间等实验条件的改变而变动。

       凡应用校准曲线的分析方法，都是在样品测得信号值后，从校准曲线上查得其含量(或浓度)。因此，绘制准确的校准曲线，直接影响到样品分析结果的准确与否。此外，ELISA试剂盒校准曲线也确定了方法的测定范围。

【注意事项】

1、ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4、请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6、底物请避光保存。

7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9、本试剂不同批号组分不得混用。