小鼠ELISA试剂盒技术说明
时间:2024-11-12 阅读:139
小鼠ELISA试剂盒的整体概念。接着分别从原理、特点和使用方法三个方面进行说明。在原理部分,简述了抗原 - 抗体特异性结合反应的过程。特点方面突出了高灵敏度、特异性强、操作简便和稳定性好等优势。使用方法则按照一般的实验流程,从样本处理到最终测定进行了较为详细的描述。
采用抗原 - 抗体特异性结合反应。将已知的抗原或抗体固定在固相载体表面,加入待检测的小鼠ELISA试剂盒样本,样本中的目标分子与固相载体上的抗原或抗体结合,再加入酶标记的二抗,通过酶催化底物产生显色反应,根据颜色的深浅来确定目标分子的含量。
一、操作步骤:
1.使用前,将所有小鼠ELISA试剂盒充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,小鼠ELISA试剂盒轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。 需要而未提供的小鼠ELISA试剂盒和器材。
二、特点:
高灵敏度:能够检测到微量的目标分子。
特异性强:对特定的目标分子具有高度的选择性。
操作简便:无需复杂的仪器设备,实验步骤相对简单。
稳定性好:小鼠ELISA试剂盒在一定的储存条件下能够保持较长时间的稳定性。
三、使用方法:
样本处理:根据不同的目标分子,对小鼠ELISA试剂盒样本进行适当的处理。
加样:将标准品和处理后的样本加入到小鼠ELISA试剂盒的微孔板中。
孵育:在特定的温度和时间下进行孵育,使抗原 - 抗体充分结合。
洗涤:去除未结合的物质。
加酶标二抗:加入酶标记的二抗。
再次孵育和洗涤。
显色:加入底物,产生显色反应。
测定:使用酶标仪测定吸光度值,计算目标分子的含量。
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