GelRed and Gelgreen 核酸凝胶染料

zui灵敏 , zui稳定的核酸凝胶染色试剂，是真正的EB替代产品！

部分产品报价

由美国BIOTIUM公司技术专家研发的GelRed 和GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成任何环境污染。(下载美国Litron Laboratories, Inc. 完整安全检测报告）

目前大多数商业化的核酸染料（凝胶染色试剂）总是在安全性、稳定性和灵敏性等方面不*令人满意。例如，虽然 EB (溴化乙啶）作为目前使用zui广泛的核酸凝胶染色试剂，能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度，但它是一种高诱变性的化学物质。而且EB染色后具有较高的背景荧光信号（如图1）。 SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被厂家宣传为zui灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解，稳定性差导致染色效果极不可靠。 SYBR safe 被认为是市场上较为安全的核酸染料 ，但它的染色效果还远不及 SYBR Green I 。

至于国内有公司宣称的新产品Goldview，我们不想多加评论。因为从极为相似的对比试验结果来看，该产品似乎就是AO（丫啶橙 ，一种剧毒产品，且荧光亮度不佳）。请看Goldview 与 AO 对比试验结果（其中Goldview是从国内某公司采购，AO则来自SIGMA，报告来自开放生物）

特性:

 高灵敏度 
GelRed 和 GelGreen 是目前市场中zui灵敏的凝胶核酸染料
 稳定性* 
可以使用微波炉加热，可以在室温下保存
 更安全  
艾姆斯氏试验结果表明，该染料的诱变性远小于 溴化乙锭 （ EB ） 
 广泛的适应性  
适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色 
 染色过程简单  
与 EB 一样，在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；而电泳后染色过程也只需 30 分钟且无需脱色或冲洗   
 对 DNA 和 RNA 的迁移影响极小  
对核酸迁移的影响小于 SYBR Green I 
 与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置*兼容  
使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时， GelRed 可以*的替代 EB ；使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时， GelGreen 足以替代任意一种 SYBR 染料（见图 4 中的光谱图）

Biotium公司的GelRed 和 GelGreen 无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色，都表现出了*的灵敏度。为配合 312 nm UV 凝胶成像系统而设计的 GelRed ，在使用了我们新开发的具有的试验步骤后（该试验步骤中使用稀释的 NaCl 溶液替代传统的 TBE 缓冲溶液），在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于 SYBR Gold 。但与 SYBR Gold 不同， GelRed 在预制凝胶中使用时仍然有*的灵敏度，事实上GelRed 在检测低浓度、微量 DNA 方面比 EB 表现出更高的灵敏度，尤其对小分子量的 DNA 检测非常灵敏（图1）。 GelGreen 可以满足使用 488 nm 激光凝胶扫描仪或者可见光激发的 Dark Reader 的研究人员的使用要求。 GelGreen 无论是在预制凝胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBR Green I 灵敏度相当，但不存在后者的不稳定性问题。实际上， GelRed 和 GelGreen ，特别是 GelRed 非常稳定，可以长期在室温下保存。当这两种染料稀释在 TBE 或者类似的电泳缓冲溶液中时甚至可以使用微波炉加热，便于采用常规方法制备预制凝胶。含有染料的预制凝胶可以成批制备，长期保存。

同样重要的是， GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 提高了安全性。 独立的测试服务公司（ Litron Laboratories, Inc. ）进行的标准艾姆斯氏测试结果表明， 在 18.5 μ g /mL （该浓度远高于推荐用于电泳后染色的 约 4 μ g/mL 的 3X 染色液 ）浓度下， GelGreen 没有诱变性，而 GelRed 也仅在 S9 代谢活化时有微弱的诱变性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞，正是这一特性降低了染料的细胞毒性。如图3。相反， SYBR Green I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色，这正是由于它能快速的被细胞吞入。由于已知 SYBR Green I 对紫外线导致的突变有强烈的增强作用（ Ohta et al. Mutat. Res.  492 , 91(2001) ），因此它的高细胞膜透性使它在紫外环境观察时成为凝胶染色的主要有害物质。
 

GelRed使用方法：

1：胶染法（用法同EB）

1）制胶时加入GelRed核酸染料（例如：每50mL琼脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000 × 储液，以此比例类推）。

2）按照常规方法进行电泳。

注意事项：此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做100块50mL的胶。由于GelRed具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将GelRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。GelRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备，并长期保存直到使用。

此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

2．泡染法

1）按照常规方法进行电泳。

2）用H2O将GelRed 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液。（例如将15μL GelRed 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中）。

3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右，染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。

注意事项：用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。3× GelRed染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。

如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度；选用更长的凝胶；延长凝胶时间以保证边缘清晰；改进上样技巧或选择泡染法染色。

特别提醒：如果您使用的是紫外成像仪，请选择GelRed；如果您使用激光成像仪或希望在可见光下

观测，请选择GelGreen在极少数情况下，质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低，

此时建议同时尝试两种染色方法以决定哪种方法更加合适。

郑重声明：

凡是市场上声称具有与Gelred和Gelgreen相同特性的 EB 替代品，且不指明是 Biotium 公司品牌的核酸染料，经检验都是通过Gelred或 Gelgreen稀释后重新包装的水货，染色质量远不及Biotium原包装产品。我们鄙视这种损害客户利益的行为，并坚决打击，发现一次我们将不再向其供货！ 在此，我们呼吁用户在购买Biotium公司产品时， 请选择开放生物--Biotium中国总代理（OPE）或者上海起发实验试剂有限公司购买 。

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