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PS-304 不锈钢开口直壁容器
蛔虫卵测定、沉淀集卵法
容量:10L带刻度
配套 1ML 网格 浮游生物计数框 和 5ML S型 浮游生物计数框
沉淀集卵法主要通过样品浓缩,杂质分离,镜检计数等环节对水中蠕虫卵进行测定,用60目筛网过滤去除样品中较大的杂质,利用回传卵比重大于水和易于沉淀的特定特性过夜沉淀浓缩水样,用虹吸的方法弃去上清液,用表面活性剂吐温80作为残液及沉淀转移时的清洗剂,进一步离心浓缩转移的剩余物,收集到的浓缩物用乙酸-乙酸钠缓冲液混匀控制溶液PH值,获得最佳亲水-亲脂平衡,加入乙酸乙酯吸收水中的脂肪类杂质使蛔虫卵更易下沉,再次离心浓缩样品并弃去上部脂肪杂质层及缓冲液层,获得的含卵沉淀层用饱和硝酸钠溶液混匀,于计数框中静置漂浮后镜检,即可测得水样中蛔虫卵的数量。
不锈钢开口直壁容器10L(蛔虫卵测定)蛔虫卵测定 沉淀集卵法:
蛔虫卵分受精卵和未受精卵。受精卵呈宽椭圆形。蛔虫卵一旦进入人体,在它发育到成熟的整个过程中都会给人体造成危害。蛔虫卵在土壤、肥料、人体等自然界广泛存在!防止粪便污染环境是切断蛔虫传播途径的重要措施。
蛔虫卵死亡率直接影响肥料的效果,可采用五格三池贮粪法,使粪便中虫卵大部分沉降在池底。由于粪水中游离氨的作用和厌氧发酵,虫卵可被杀灭,同时也会增加肥效。在用于粪做肥料的地区,可采用泥封堆肥法,三天后,粪堆内温度可上升至52℃或更高,可以杀死蛔虫卵。
那么蛔虫卵死亡率又是如何测定的呢?依据GB/T 19524.2—2004如下:将碱性溶液与肥料样品充分混合,分离蛔虫卵,然后用密度较蛔虫卵密度大的溶液为漂浮液,使蛔虫卵漂浮在溶液的表面,从而收集检验。
1、蛔虫卵分离
称取5.0~10.0 g样品(颗粒较大的样品应先进行研磨),放于容量为50 mL离心管中,注入NaOH溶液25~30 mL,另加玻璃珠约10粒,用橡皮塞塞紧管口,放置在振荡器上,静置30 min后,以200~300 r/ min频率振荡10~15 min。振荡完毕,取下离心管上的橡皮塞,用玻璃棒将离心管中的样品充分搅匀,再次用橡皮塞塞紧管口,静置15~30 min 后,振荡10~15 min。
2、离心沉淀
从振荡器上取下离心管,拔掉橡皮塞,用滴管吸取蒸馏水,将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲入管中,以2000~2500 r/ min速度离心3~5 min后,弃去上清液。然后加适量蒸馏水,并用玻璃棒将沉淀物搅起,按上述方法重复洗涤三次。
3、 离心漂浮
往离心管中加入少量饱和 NaNO3 溶液,用玻璃棒将沉淀物搅成糊状后,再徐徐添加饱和 NaNO3 溶液,随加随搅,直加到离管口约1 cm为止,用饱和 NaNO3 溶液冲洗玻璃棒,洗液并入离心管中,以2000~2500 r/ min速度离心3~5 min。
用金属丝圈不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸馏水的烧杯中,约30次后,适当增加一些饱和NaNO3 溶液于离心管中,再次搅拌、离心及移置液膜,如此反复操作3~4次,直到液膜涂片观察不到蛔虫卵为止。
4、抽滤镜检
将烧杯中混合悬液,通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼氏漏斗抽滤。若混合悬液的浑浊度大,可更换滤膜。
抽滤完毕,用弯头镊子将滤膜从漏斗的滤台上小心取下,置于载玻片上,滴加二、三滴甘油溶液,于低倍显微镜下对整张滤膜进行观察和蛔虫卵计数。当观察有蛔虫卵时,将含有蛔虫卵的滤膜进行培养。
5 、培养
在培养皿的底部平铺一层厚约1 cm 的脱脂棉,脱脂棉上铺一张直径与培养皿相适的普通滤纸。为防止霉菌和原生动物的繁殖,可加入甲醛溶液或甲醛生理盐水,以浸透滤纸和脱脂棉为宜。
将含蛔虫卵的滤膜平铺在滤纸上,培养皿加盖后置于恒温培养箱中,在28 ℃~30 ℃ 条件下培养,培养过程中经常滴加蒸馏水或甲醛溶液,使滤膜保持潮湿状态。
6、 镜检
培养10~15 d ,自培养皿中取出滤膜置于载玻片上,滴加甘油溶液,使其透明后,在低倍镜下查找蛔虫卵,然后在高倍镜下根据形态,鉴定卵的死活,并加以计数。镜检时若感觉视野的亮度和膜的透明度不够,可在载玻片上滴一滴蒸馏水,用盖玻片从滤膜上刮下少许含卵滤渣,与水混合均匀,盖上盖玻片进行镜检。
7、 判定
凡含有幼虫的,都认为是活卵,未孵化或单细胞的都判为死卵。
8、 结果计算
式中:
K —蛔虫卵死亡率(%)
N1—镜检总卵数
N2—培养后镜检活卵数