多酚氧化酶检测试剂盒(PPO)说明书可见分光光度法
时间:2020-03-13 阅读:2856
多酚氧化酶检测试剂盒(PPO)说明书
可见分光光度法
货号:YJS2203 规格:50管/24样
产品简介:
PPO主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
PPO能够催化邻苯二酚产生醌,后者在525nm有特征光吸收。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容:
提取液:液体,60ml×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体,40ml×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体,10ml×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体,20ml×1瓶,4℃保存
操作步骤:
- 粗酶液提取:
1、收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200万细菌或细胞加入400μl提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次);8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
2、称取约0.2g组织,加入1ml提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
二、测定操作表:
试剂名称(μl) | 测定管 | 对照管 |
试剂一 | 600 | 600 |
试剂二 | 150 | 150 |
样本 | 150 |
|
煮沸的样本 |
| 150 |
37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)中准确水浴10min后,迅速放入冰浴中冷却 | ||
试剂三 | 300 | 300 |
充分混匀,5000g,常温离心10min,收集上清,用蒸馏水调零,525nm处检测测定管和对照管吸光度。
注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行1min沸水浴处理
PPO活性计算:
1、血清、血浆或果汁PPO活性计算
单位定义:每分钟每毫升样品在每毫升反应体系中使525nm吸光值变化0.01为一个酶活力单位
PPO(U/mL)=(A测定-A对照)×反应总体积÷(V液*×V样*÷V样总*) ÷0.01÷反应时间
=80×(A测定-A对照)÷V液*
2、组织中PPO活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每分钟每mg组织蛋白在每毫升反应体系中使525nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。
PPO(U/mg prot)=反应总体积(1200μl)÷样本体积(150μl)÷反应时间(10min)÷0.01×(A测定-A对照)÷蛋白浓度(mg/ml)=80×(A测定-A对照)÷蛋白浓度(mg/ml)
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每分钟每g组织蛋白在每毫升反应体系中使525nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。
PPO(U/g 鲜重)=反应总体积(1200μl)÷样本体积(150μl)÷反应时间(10min)÷0.01×(A测定-A对照)÷样本鲜重(g/ml)=80×(A测定-A对照)÷样本鲜重(g/ml)
3、按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每分钟每1万个细菌或细胞在每毫升反应体系中使525nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。
PPO(U/104 cell)=反应总体积(1200μl)÷样本体积(150μl)÷反应时间(10min)÷0.01×(A测定-A对照)÷细菌或细胞密度(104/ml)=80×(A测定-A对照)÷500*
*V液:加入的血清、血浆或果汁的体积
*V样:加入样本体积
*V样总:加入提取液体积
*500:细菌或细胞总数500万