总抗氧化能力（T-AOC）试剂盒说明书
时间：2020-03-09 阅读：2714
总抗氧化能力（Total antioxidant capacity ，T-AOC）
试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液
及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理
在酸性环境下，物质还原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ的能力反映了其总抗氧化能力。
自备实验用品
可见分光光度计、恒温水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液：液体 60mL×1 瓶，使用前预冷。
试剂一：液体 50mL×1 瓶，避光保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，避光保存。
样品的制备
(1) 血清、血浆、唾液或尿液样品
血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超30 d）后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤
混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，使用前预温至 37℃ 。
| 空白管 | 测定管 |
混合液（μL） | 900 | 900 |
样品（μL） |
| 30 |
双蒸水（μL） | 120 | 90 |
充分混匀，反应10min，双蒸水调零，1mL玻璃比色皿，测定593nm处吸光值，△A= A测定 -A空白 | ||
注意：空白管只需测定一次。
总抗氧化能力计算
1. 定义：样品的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值（△A）所需的标准液离子浓度表示。
标准曲线为 y=0.6308 x +0.1291，R2=0.9989
2. 计算公式：
(1)按蛋白浓度计算
总抗氧化能力（U/mg prot）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反总÷（V 样× Cpr）
=53.9×（△ A-0.1291）÷ Cpr
(2)按样品质量计算
总抗氧化能力（U/g）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反总÷（V 样÷V 样总×W）
=53.9×（△ A-0.1291）÷ W
(3)按细胞数量计算
总抗氧化能力（U/104 cell）=1÷0.6308×（△A-0.1291）×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）= 53.9×（△A-0.1291）÷ 细胞数量（万个）
(4)按液体体积计算
总抗氧化能力（U/mL）=1÷0.6308×（△A-0.1291）× V 反总÷V 样
=53.9×（△A-0.1291）÷ Cpr
V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 反总：反应总体积，1.02mL；V 样：反应中样品体积，
0.03mL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL
注意事项
1. 试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并
戴乳胶手套操作。
2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生
干扰。
3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反
应的还原剂。
4. 如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释或浓缩后再进行测
定。
5. 试剂盒 2-8℃保存。