免疫组化ABC法

（一）、仪器设备
   1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；
    2）水浴锅

（二）、试剂 
    1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。
    2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。
    3）0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。
    4）1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0,加水至1000ml。
    5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。
    6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
    7）封裱剂：
    a、甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9.0～9.5）等量混合；
    b、甘油和TBS(或PBS)配制。 
    8）TBS/PBS pH9.0～9.5，适用于荧光显微镜标本；pH7.0～7.4适合于光学显微镜标本。

（三）、   
    SABC法
    1)脱蜡、水化。
    2)PBS洗两次各5分钟。
    3)用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭5～10分钟，蒸馏水洗3次。
    4)抗原修复。
    5)PBS洗5分钟。
    6)滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。
    7)滴加抗小鼠一抗（合适的浓度）,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时 

  （4℃过夜后在37℃复温45分钟）。
    8)PBS洗三次每次2分钟。
    9)滴加生物素化二抗,20℃～37℃20分钟。
    10)PBC洗3次每次2分钟。
    11)滴加试剂SABC，20℃～37℃20分钟。
    12)PBS洗4次每次5分钟。
    13)DAB显色：DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。
    14)蒸馏水洗。苏木素复染2分钟、盐酸酒精分化。
    15)脱水、透明、封片、镜检。

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