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炭疽杆菌(BA)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)
【产品名称】 将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反
通用名称：炭疽杆菌(BA)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)
应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
Name ：Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method) 4 扩增（核酸扩增区）
【包装规格】48T/盒
炭疽是由炭疽杆菌（Bacillus Anthracis, BA）感染引起的一种人兽共患病。BA 在环境中形成芽孢，可长期、稳定地存在于自然界中。由于 BA 的稳定性及其致病性，易引发突发公共卫生事件。目前的 BA 检测方法主要基于病原体的培养、染色镜检、血清学检测等，但这些方法均不适合早期的快速侦检。基于核酸检测的荧光-PCR技术，因其灵敏度高、操作简单、特异性好，可快速检测炭疽病原，及时控制炭疽疫
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
情 。
[1] 本试剂盒适用于检测皮肤水泡液、咽拭子、可疑食物等样本中的炭疽杆菌，用于炭疽杆菌感染的辅助诊断。 5 结果分析判定
【检验原理】
6.1 结果分析条件设定
本试剂对炭疽杆菌特异性基因设计引物和荧光探针[2-3]，用荧光 PCR 技术对炭疽 设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现杆菌的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调
节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
名 称 规 格
核酸提取液酶液
BA 反应液
BA 阳性质控品
阴性质控品
注：
1.5mL×2 管
50μL×1 管
1.0mL×1 管
50μL×1 管
250μL×1 管
7结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，丏曲线有明显的指数增长曲线。
可疑：检测通道 Ct 值>35.0，丏出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。
阴性：样本检测结果无 Ct 值丏无明显的扩增曲线。
1） 不同批号试剂不能混用。 Ø 样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
2） 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融数不超过 5 次，有效期 12 个月。
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列
Ø 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
Ø 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
Ø 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
Ø 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
Ø 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定 量检测不准确的结果；荧光定量 PCR 检测仪。 Ø 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【标本采集】
皮肤炭疽，取水泡液 1mL；肺炭疽，采集咽拭子标本，放入标本采集管中；肠炭疽，取粪便 1g
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
9. 质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，丏 Ct 值≤32；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
Ø 所有操作严格按照说明书进行；
Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，*混匀并短暂离心；
Ø 反应液应避光保存；
1. . 样品处理（样本处理区） Ø 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
1.1 1 样本前处理
固体样本：手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μ
L 于 1.5mL 灭菌离心管中；液体样本：直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1 111 提取
1) 对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
2) DNA 的提取也可以采用深圳绿食源生物技术有限公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服；
Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通 则》进行处理。
试剂 BA 反应液 酶液
用量（样本数为 N）20μL
1μL将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。
