实验技术简介:多肽合成是一个固相合成顺序一 般从C端 (羧基端)向N端(氨基端)合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来,经过不断的改进和完善，到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，表现出了经典液相合成法*的优点，从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。多肽合成总的来说分成两种:固相合成和液相多肽合成。

实验技术原理:

多肽合成仪以固相合成为反应原理，在密闭的防爆玻璃反应器中使氨基酸按照已知顺序(序列，一般从C端-羧基端向N端-氨基端)不断添加、反应、合成，操作终得到多肽载体。固相合成法，大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。

实验操作流程:

1、去保护: Fmoc保护的柱子和单体必须用-种碱性溶剂(piperidine) 去除氨基的保护基团。

2、激活和交联:下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。 活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽

键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环:这两步反应反复循环直到合成完成。

3、洗脱和脱保护:多肽从柱上洗脱下来，其保护基团被一种脱保护剂 (TFA)洗脱和脱保护。

多肽修饰类型:

1、C端标记技术:

C端酰胺化(Amidation,C-termainal)

醛基化(Aldehydes) 、醇基化(Alcohols) 、pNA (P-Nitroanilide)

AMC、AFC、巯基乙胺化(Cysteamide) 、酯基化(Ester) 、N-烷基化(N-AlkyI Amides)等

2、N端标记技术:

乙酰化Acetylated (Acetylated) 、Palmytolyl、 HYNIC、 生物素标记(Biotinylated)、 Br乙酰化(Bromoacetylated)

螯合反应(DOTA, DTPA conjugated)、甲醛化(Formylated)、十四烷基、 十八烷基化(Myristoylated)琥珀酰化、棕榈酸化、苹果酸化、脂肪酸化等(Succinylated)

3、荧光标记修饰:

C端修饰: AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110

N端修饰: Bodipy-FL, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-odoacetamido fluoresceinRhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS

FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA

4、环化反应:

首尾成环，中间成环，特殊成环(N -> C or Head to Tail)

2对二_硫键，3对二 硫键(Disulfide (S-S bond formation) .Triulide formation)天然产物活性肽成环(Cyclic-natural peptides )

5、甲基化修饰:

侧链甲基化Lys(For),LysS(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)N端甲基化(N-Me Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N-

Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)

6、几种特殊修饰:

各种偶联(BSA, KL H conjugated peptides for antibody production )、磷酸化 (Phosphoserine,Phosphothreonine, Phosphotyrosine)、磺化 (Sulfated Tyrosine or Serine)、MAPS (MultipleAntigenic Peptide)、糖肽(Glycopeptides)PEG修饰(PEGylation)

实验注意事项:

客户提供:

1、多肽序列、数量、纯度及特殊要求

2、冻干多肽可在-20度保存或室温保存

3、溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性PH (5-7) -20度保存。

4、为避免样品的反复冻融，hao分成小样存放。

交付标准:

台成多肽、数据.

其他:

大多数多肽的首xuan溶剂是超纯抽气水，稀Z酸或氨水分别对碱性或酸性多肽的溶解也有帮助。如果这些方法用过后还不溶解的多肽，建议用DMF,脲，guanidiniam,chloride ,acetonitnle来溶解

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