西尼罗河病毒荧光玻片法检测试剂盒

广州健仑生物科技有限公司

检查

1.实验室检查

白细胞数减少，脑炎型者脑脊液中淋巴细胞增多，蛋白增高。

2.免疫学检查

利用血清学抗体检测方法，常用ELISA（酶联免疫吸附实验）法，采用患者急性期和恢复期双份血清，两份血清同时进行检测，以恢复期血清较急性期特异性IgG抗体滴度升高4倍以上为阳性，有助于本病的诊断。

3.病原学检查

自潜伏末期至发病后第5天，从患者血液或脑脊液中分离出病毒，阳性率较高，对新分离病毒的鉴定一般采用已知血清进行中和实验。

4.分子生物学检查

RT-PCR（逆转录-聚合酶链反应）法检测，通过设计西尼罗河热病毒特异引物对血清或脑脊液标本进行RT-PCR试验，阳性率高，具有特异性诊断价值。

用途

西尼罗(WN)病毒IgG ELISA，利用了西尼罗重组抗原检测人体血清或血浆中的西尼罗抗体。本实验仅用于辅助诊断人感染了西尼罗病毒，不用于筛查血液或血液成分。仅供专业人员体外诊断使用。

概述

 感染了西尼罗病毒会导致包括脑炎等一系列症状的疾病，西尼罗病毒在世界广泛传播，已在50多个国家检测出该病毒。本试验经CDC提供的试剂检验与验证。本试验使用了一种称为WNRA的重组抗原，它可以作为西尼罗病毒感染的快速血清学指标，WNRA蛋白是一种重组抗原，它是由含有西尼罗病毒两个抗原的序列多肽构成。

实验的原理

检测西尼罗病毒IgG ELISA 是基于两步夹心法原理制造的。

提供的材料

• 微孔板（96孔 12x8）：即用  每孔均包被结合西尼罗重组抗原的单抗。2－8℃下保存至保质期。

注意：WNRA和NCA已包被于微孔板。

• IgG样品稀释液：1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。
• IgG阴性质控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要长时间储存，将其分装于小瓶里，在-70℃下储存。
• IgG阳性质控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要长时间储存，将其分装于小瓶里，在-70℃下储存。
• 洗涤液（10X）：1瓶 120ml  2－8℃下保存至使用。
• EnWash：1瓶 20ml 2－8℃下保存至使用。
• 酶联物：一瓶6ml 即用 2－8℃下保存至使用。
• TMB底物液： 1支 9ml 即用  2－8℃下保存至使用。
• 终止液；1支6ml 即用  2－8℃下保存至使用。

试剂应避免反复冻融。

西尼罗河病毒荧光玻片法检测试剂盒

操作步骤：

• 标记将要使用的板条，注意微孔板已经按照统一排列，如下所述包被西尼罗抗原和质控抗原。

• 将血清样品﹑阴性质控和阳性质控同样地用样每孔加入50ul稀释后的样品，以下为一个血清样品使用一个板条的*。
• 品稀释液按1：300稀释。

• 封板，在湿润的温育器里37℃下温育1小时。
• 温育后，用自动洗板机，使用洗涤液洗板6次。
• 在每孔中加入50ul的酶联物。
• 封板，在湿润的温育器里37℃下温育1小时。
• 温育后，用自动洗板机，使用洗涤液洗板6次。
• 每孔加入150ul的EnWash，在室温下温育5分钟
• 温育后，用自动洗板机，使用洗涤液洗板6次。
• 每孔加入75ul的TMB底物液。
• 封板，在室温下，避光处温育10分钟。
• 每孔加入50ul的终止液终止反应。
• 在450nm处读取吸光率。

结果的计算

结果的变化将会非常大，以下结果仅供指引。

计算ISR值：

计算在同一实验里WNR抗原的两个阴性质控的平均值，计算同一实验里NC抗原的两个阴性质控的平均值，用WNRA/NCA，得出阴性质控的ISR值。同样地计算阳性质控和样品得ISR值，阳性质控的ISR值应高于3.0，阴性质控的ISR值应低于1.5。

结果的判断：

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若于液体培养基中培养24h，呈均匀混浊，后期  可因产生自溶而变得澄清。甲型溶血性链球菌不产生自溶  酶，故加入胆盐等表面活性剂不能溶解，利用此特点可鉴  别甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌。肺炎链球菌在血琼脂  平板上菌落周围形成α溶血环。细菌生长的能量来源于分  解葡萄糖，伴随乳酸的形成。乳酸的堆积会抑制细菌的生  长，故间断性加入碱可使肺炎链球菌大量繁殖。Optochin  可抑制肺炎链球菌生长。该菌可分解多种糖类，产酸不产  气。胆汁溶解试验阳性、Optochin敏感试验阳性。大多数  新分离出的肺炎链球菌可发酵菊糖，故菊糖发酵试验在鉴  别肺炎球菌与甲型溶血性链球菌时有一定的参考价值。抗  原构造编辑荚膜多糖抗原存在于肺炎链球菌荚膜中。根据  荚膜多糖抗原性的不同将肺炎球菌分为91个血清型。菌体  抗原⑴C多糖：存在于肺炎链球菌细胞壁中，具有种特异性  ，为各型菌株所共有。C多糖可被血清中C-反应蛋白沉淀。  在钙离子存在时，C多糖可与正常人血清中称为C-反应蛋白  （C reactive protein,CRP）的β球蛋白结合，发生沉淀  。⑵M蛋白：具有型特异性。