手足口EV71-IgM抗体快速检测试剂盒

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 手足口EV71-IgM抗体快速检测试剂盒

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1.连锁信电场凝胶电泳嘅DNA样品嘅制备
为逃过大分子DNA喺提取过程中断裂，细胞使喺琼脂糖凝胶蚊中进行原位裂解，喺本实验中，我哋使用金黄色菩提子球菌（StapHylococcus aureus）作为例子。
1）攞100mL对数生长期金黄色菩提子球菌细胞于4℃，5000g离心5min。
2）用20mL TEN缓冲液冲洗沉淀，同样条件离心5min。之后用10mL EC缓冲液令细胞悬浮。
3）攞1.5mL细胞样品与相同体积含2%SeaPLaque琼脂糖嘅EC缓冲液快手捞捞匀并等分流溶液至封闭嘅糢块中于4℃凝固，捞前加热至琼脂糖熔解并冷却到五十℃。
4）对于，每个菌株，要15～二十个凝胶蚊，将佢哋摆到含有30～9个μg/mL RNase（50mL嘅10mg/mL嘅RNase）嘅10mL EC缓冲液中，于37℃振浪过夜。
5）去掉裂解缓冲液，换为10mL ESP缓冲液于五十℃轻度振浪温育48h。
6）将凝胶蚊摆喺10mL含有174μg/mL苯甲基huang xian氟（PMSF）嘅TE缓冲液中，室温温育4h（2h换液一次），以灭生ESP中嘅蛋白酶K。
7）用TE清洗琼脂蚊6h（2h换液一次），置于TE中4℃保存。
2.制酵素消化
提高PFGE嘅分辩率决于100～1000kb片段电泳结果嘅重复率，佢同酵素切关系密切，可喺琼脂糖凝胶蚊中使用啱嘅内切酶消化。
1）25μL10×反应缓冲液，30U制酵素，加对蒸水至250μL捞匀。
2）攞个凝胶蚊置其中，啱温度下温育过夜（按内切酶要求）后，用TE缓冲液洗涤并贮存。
3.应用PFGE对样品DNA进行分析
1）用0.5×TBE缓冲液制备一个0.8%SeakemHGT琼脂糖凝胶，胶嘅厚度尽量唔关样品凝胶蚊相符。若用Wide Minisub Cell进行电泳嘅话，50mL应该溶液即可。
2）胶凝后，因住移去样品呀。将凝胶蚊用刀切开与加样窿*嘅大细，将呀心呀插入加样窿，逃过惹气泡。（若样品喺溶液中，以l:1嘅比率与五十℃2%Seaplaque琼脂糖相捞，快手系度注入加样孔中）。