植物基因组 DNA 提取试剂盒

（Plant Genomic DNA Extraction Kit）

（适合从植物组织中提取基因组 DNA ）

试剂盒组成    50 (50 次)

Plant Genomic DNA Extraction Ki 50

2 ml Collection Tube 50

Buffer KB (Column solution) 15 ml

Buffer KBL1 (Lysis solution) 2×30 ml

Buffer KW1(Wash solution ) 50 ml

Buffer KW (Wash solution ) 使用前加入 50 mL  无水 乙醇

Buffer KE (Elution solution) 15 ml

储存条件

本试剂盒在室温（15-25 ℃）下可保存一年。

产品特点：

TM Plant Genomic DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜技术，*去除植物组织细胞中蛋白和大部分 RNA 等各种干扰物，提取高纯度的DNA。试剂盒采用*的缓冲系统，可从绝大多数不同类型的植物包括水稻，小麦，玉米，拟南芥和大豆等植物中快速提取基因组 DNA。一般情况下，100 mg 新鲜组织的基因组 DNA 产量可达 5-30 μg。本试剂盒不适宜从棉花，烟草，油菜等富含多酚多糖类植物中提取总 DNA，多酚多糖类植物的提取可选用其他试剂盒 。

注意事项：

1.实验前准备工作 ：详细阅读该手册熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分、研钵、研棒、药匙、1.5 ml 和 2 ml 灭菌离心管以及 37 ℃和 65 ℃的温浴条件。

2.2. KBL1 和 KW1 在低温时可能产生混浊或沉淀，在 37-65 ℃温浴片刻即可。

3. Buffer KW *次使用前请按瓶上标签加入 50 ml 无水乙醇。每次使用后，请立即拧紧盖子。

操作步骤：

（ 一） 平衡吸附柱

1. 取一TM Mini Column 柱装在一个 2 ml 收集管上（已备）。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子内，室温 13 000 rpm 离心 1 min，使平衡液*流过柱子。弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。

注意：柱子不平衡，将导致 DNA  产率减少。

（ 二 ）样品处理

2. 组织破碎：可根据不同样品研磨难易程度选择以下方法：

1）液氮研磨：将 50-100 mg 组织直接放入研钵，加入少量液氮，迅速研磨，再加少量液氮，再研磨，如此三次，将样品研成粉末。用药匙迅速将样品干粉按 100 mg 组织/1000 μl KBL1 的比例加入一新的 2 ml 离心管中。加入 KBL1 后，震荡混匀。室温 13 000 rpm 离心 2 min。

2）直接研磨：对于新鲜植物组织，将 50-100 mg 组织直接放入研钵，按 100 mg 组织/1000 μl KBL1 比例加入 KBL1，直接在 KBL1 中将样品研磨匀浆后，转入 1.5 ml 离心管） （推荐）。室温 13 000 rpm 离心 5 min。弃去沉淀，上清液待转移。

注意：

1 ）的 上述的推荐体积为使用的 KBL1  的小体积比例。 基因组DNA  的纯度取决于 KBL1  的体积和标本的量，理论上 KBL1  的体积越大，

样 本的量越少， DNA  质量越好！  不同的植物组织有不同的比例，请在正式实验前摸索。

2 ）尽量使用新鲜样品，或者样品取得后立即直接保存于液氮或者

-70  ℃。

（三 ）吸附

3.将上清液转移到平衡过的吸附柱内，室温 13 000 rpm 离心 30 s，使裂解液*流过柱子。弃去收集管中的过滤液，把柱套回收集管中。

4.注意：

1 ）室温太低可能造成 KBL1  混浊或沉淀，在 37  ℃ 温浴片刻即可。

2 ）如上清液 体积过大，可以分成数次上柱，每次 不要超过 700 μl。

4. ）（可选）加入 30 μl 浓度为 20-50 μg/ml 的 RNase A 于柱的膜上，37 ℃放置 5-10 min。

注 意：本试剂盒没有配备 RNase A  溶液。一般来说，这一步没有必要，因对 为本试剂盒的纯化柱对 RNA  没有吸附能力。如果实验要求不能残留微量RNA ，可采用这一步处理 。

 ( 四 )  漂洗

5. 加入 700 μl Buffer KW1，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。

6. 加入 700 μl Buffer KW，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。 注意：Buffer KW  在*使用之前必须加入 50 ml  无水或95% 乙醇，并置于室温下保存。

7.  （可选）重复用 700 μl 70%乙醇（室温）洗涤柱子，室温 13 000 rpm离心 1 min。（注意：用 70%乙醇漂洗有利于提高 DNA 纯度）

8. 弃去收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。室温下，13 000 rpm 离心 2 min 以甩干柱子基质残余的液体。

注意： 此步骤不可省，否则 将导致乙醇残留于 DNA  中 ，影响后续反应。

 ( 五) ) 洗 脱

9. 把柱子装在一个新的 1.5 ml 离心管上，加入 50 μl 的 KE（可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或纯水代替，纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0），65 ℃放置 5-10 min，13 000 rpm 离心 1 min 以洗脱 DNA。 （也可以将 KE  预热至 65 ℃ ，再加至膜上，可以减少放置时间至 1min ）注意：小心加 KE  到柱 中吸附膜的中间部位， 并 确保 液体 将膜全部覆盖。

10 ．DNA 应保存于 4 ℃，若长时间保存，可冻存于-20 ℃。

本司部分DNA提取试剂盒，致电：020-8257 4011杨永汉

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