血液基因组 DNA 提取试剂盒（快速型）

Blood Genomic DNA Extraction Kit

（适合从 50-200 μl 血液中提取基因组 DNA） 

血液基因组 DNA 提取试剂盒（快速型）

试剂盒组成：50 (50 次)

储存条件：本试剂盒在室温（15-25 ℃）下可保存一年。

产品特点：

TM Blood Genomic DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜技术，*去除全血中蛋白和大部分 RNA 等各种干扰物，提取高纯度的 DNA。试剂盒采用*的缓冲统，适用于多种不同类型的血液，同样适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和其它无细胞体液中提取病毒 DNA。

注意事项：

1.实验前准备工作：详细阅读该手册熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分、1.5 ml 和 2 ml 灭菌离心管、以及 37 ℃和 65 ℃的温浴条件。

2.KBL1 和 KW1 在低温时可能产生混浊或沉淀，在 37-65 ℃温浴片刻即可。

3.Buffer KW *次使用前请按瓶上标签加入 50 ml 无水或 95%乙醇， 并常温保存。每次使用后，请立即拧紧盖子。

操作步骤：

（一）平衡吸附柱

1.取一 KarrotenTM Mini Column 柱装在一个 2 ml 收集管上（已备）。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子内，室温 13 000 rpm 离心 1 min，使平衡液*流过柱子。弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。

注意：柱子不平衡，将导致 DNA 产率减少。

（二）样品处理

2.（1）按 100 μl 全血（适合各种抗凝剂，EDTA 较好）加入 100 μl 等体积的 KTL1，混匀，37℃温浴 5min。

(2) 加入 1000 μl KBL1，混匀 1min。

注意： 取样体积因物种不同有所差异。人血以 100-200 μl 为，小鼠以 50-100 μl 为。且当全血体积大于 200 μl 时，KBL1 体积按比例扩大。

（二）吸附

3.将混合液转移至已平衡的吸附柱内，室温 13 000 rpm 离心 30 s，使裂解液*流过柱子。保留柱，弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管。

注意：如混合液体积过大，可分数次上柱，每次上样量不要超过 700 μl。

4.（可选）加入 30 μl  浓度为 20-50 μg/ml 的RNase A  于柱的膜上，37 ℃放置 5-10 min。

注意：本试剂盒没有配备 RNase A 溶液。一般来说，这一步没有必要，因为本试剂盒的纯化柱对 RNA 没有吸附能力。如果实验要求不能残留微量RNA，可采用这一步处理。

(三) 漂洗

5.加入 700 μl Buffer KW1，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。

6.加入 700 μl Buffer KW，室温 13 000 rpm 以上离心 30 s，弃去收集管

中的过滤液，保留柱。

注意：Buffer KW 在*使用之前必须加入 50 ml 无水乙醇，并置于室温下保存。

7.（可选） 重复用 700 μl 70%乙醇（室温）洗涤柱子，室温 12 000 rpm

离心 1 min。

8.弃收集管中的滤液，将空柱套回 2 ml 收集管内。室温下，高转速或 13 000 rpm 离心 2 min 以甩干柱子基质残余的液体。

注意：此步骤不可省，否则将导致乙醇残留于 DNA 中，影响后续反应。

(四)洗脱

9.把柱子装在一个新的 1.5 ml 离心管上，加入 30-50 μl 的 KE（可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或纯水代替，纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0）于膜的中央，65 ℃放置 5-10 min，13 000 rpm 以上离心 1 min 以洗脱 DNA。（也可以将 KE 预热至 65℃，再加至膜上，可以减少放置时间至 1min）

注意：小心加 KE 到柱中吸附膜的中间部位，并确保液体将膜全部覆盖。

10.DNA 可保存于 4 ℃，若长时间保存，可冻存于-20 ℃。

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诊断血清：沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、大肠艾希氏菌诊断血清、霍乱弧菌诊断血清等。

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