【产品名称】

中文名称：植物过氧化物酶（POD）酶联免疫试剂盒

【包装规格】

96T/盒

【预期用途】

仅供科研使用，本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中过氧化物酶（POD）活性。

【检测原理】

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化物酶（POD）水平。用纯化的植物过氧化物酶（POD）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入过氧化物酶（POD），再与HRP标记的过氧化物酶（POD）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的过氧化物酶（POD）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物过氧化物酶（POD）活性浓度。

【产品性能】

1、物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气(如有漏气，不影响使用）。

2、剂量反应曲线线性

标准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。

3、检测范围

0.6 mU/L - 28 mU/L。

4、灵敏度

检出剂量小于0.15 mU/L。

5、精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV 表示。CV（%） = SD/mean×100

批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD 值。

批间差：选取3 个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定10 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD 值。

批内差： CV<6.8%

批间差： CV<7.2%

6、回收率

分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。

7、线性

分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率

注意：使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致。

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶标仪（建议仪器使用前提前预热）

2、精密移液器、吸头、加样槽

3、蒸馏水或去离子水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、EP管

7、无粉一次性乳胶手套

【储存条件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。

  2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

注意：试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在实验后1 个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

【适用仪器】

  半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。

【样本要求】

1.样本类型和采集

血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置0.5-2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
    血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

细胞裂解液: 吸弃培养液，用PBS（0.01 M，pH 7.4）将细胞洗一遍。用细胞刮刮下细胞（不能用胰酶和EDTA 处理），加入2-5 mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。悬浮细胞可省略。收集细胞悬液，4℃ 1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。加入适量的预冷PBS或非变性细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑制剂）重悬细胞,通常6孔板一个孔的细胞量需要150-250μL PBS重悬。 将样品放入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融3次，使细胞充分裂解,也可将样品进行超声破碎，以达到裂解的目的。4℃ 10000×g 离心10min，除去细胞碎片，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.样本保存和稳定性

样本在2-8℃条件下，可以储存72h，在- 20℃或-80℃可以储存6个月及以上。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融。