高糖对大鼠腹膜间皮细胞分泌细胞因子的影响及苦参碱的干预作用

朱士彦１，甘 平２，廖 彧１，巫建芳１，龙贵华１

（１．广东省佛山市顺德区龙江医院肾内科 ５２８３１８；

２．贵阳医学院附属医院肾内科，贵阳 ５１００００）

［摘要］ 目的 研究高糖刺激下大鼠腹膜间皮细胞分泌肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）和转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）及苦参碱的干预作用，探讨腹膜纤维化发生机制。方法 通过体外培养大鼠腹膜间皮细胞（ＰＭＣｓ），依据加入药物浓度分成５组：２．５％葡萄糖组（ｎ＝１５，Ａ 组）；低糖苦参碱组（２．５％葡萄糖，ｎ＝１５，Ｂ组）；４．２５％葡萄糖组（ｎ＝１５，Ｃ组）；高糖 苦 参 碱 组（４．２５％葡萄 糖，ｎ＝１５，Ｄ组）；对照组（ｎ＝１５，Ｅ 组，仅加不含血清的 ＤＭＥＭ－Ｆ１２ＢＭＳＣ 培养 基），分别 于 第 ２４、４８、７２小时收集培养上清液，采用ＥＬＩＳＡ 法测定各组培养上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 浓度 的 变 化，同时观察各组大鼠腹膜间皮细胞光镜下的表现。结 果 光 镜下，可见 Ｅ组和 Ｂ组腹膜间皮细胞小，呈卵圆形或圆形，生长较为密集。Ａ、Ｃ、Ｄ组腹膜间皮细胞大、呈梭形或多边形，分布较为稀疏；在 Ａ 组，培养上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平较 Ｅ组无明显统计学变化（Ｐ＞０．０５）；而在Ｃ组，培养上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平较 Ｅ组增加明显，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。在 Ｂ组和 Ｄ组中，ＰＭＣｓ分泌 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平 Ｂ组较 Ａ 组减少，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；Ｄ组较 Ｃ组明显下降，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论 苦参碱能拮抗高糖致大鼠腹膜间皮细胞分泌 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１，从而保护腹膜间皮细胞。

［关键词］ 葡萄糖；苦参碱；肿瘤坏死因子α；转化生长因子β１；腹膜间皮细胞腹膜 透 析 （ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｄｉａｌｙｓｉｓ，ＰＤ）由于自身生物相容 性好，中分子物质清除效率高等优点，成为目前终末期肾脏疾病的shou选透析方式。但是反复发作腹膜炎症可使有效腹膜透析面积减少，从而导致腹膜对溶质的清除及水分的超滤功能减退甚至功能衰竭，是部分 ＰＤ患者改行血液透析治疗的主要原因之一 ［１］。实验表明，腹膜长期处于高渗微环境，可终破坏腹膜的整体结构性，葡萄糖及其与机体产生的炎变产物是致 ＰＤ相关性腹膜超滤衰竭重要原因之一［２－３］。如何从病理生理学机制方面深入探究腹膜超滤衰竭的发病机理，成为近年来医学研究的重要课题内容。

现有研 究 证 实 人 腹 膜 间 皮 细 胞 （ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＰＭＣｓ）具有多重重要的生理功能，如分泌、吸收、修复、支持等。在腹膜发生炎变时，ＰＭＣｓ自身分泌的炎性因子和细胞因子，又影响到腹膜 自 身 的 修 复［４－５］。本研 究 旨 在 探 讨 高 糖 致大鼠 ＰＭＣｓ分泌肿 瘤 坏 死 因 子α（ＴＮＦ－α）和转 化 生 长 因 子β１（ＴＧＦ－β１）及苦参碱的抗纤维化作用，为临床防治腹膜纤维化，延缓病人的生命，有着极其重要的现实意义。

１ 材料与方法

１．１ 材 料 选 取 健 康 ＢＡＬＢ／ｃ大 鼠 ３５ 只，雌 雄 兼 用，体 重１００～１２０ｇ，同等条件下 饲 养，鼠 龄６～８周，由贵阳医学院动物实验中心提供。

１．２ 主要试剂 胎牛血清（ＦＣＳ），ＤＭＥＭ－Ｆ１２ＢＭＳＣ培养基，胰蛋白酶液，卵母细胞裂解液，ＤＡＢ显色剂（编号 ＡＲ１０２２），抗体稀释液（编号 ＡＲ１０１６），Ｈａｎｋｓ平衡 盐 溶 液，多 聚 赖 氨 酸，枸橼酸盐缓冲液，以上均购自郑州益康生物工程有限公司；ＴＮＦ－αＥＬＩＳＡ 试 剂 盒 （上海恒远生物科技有限公司，编 号：ＡＲ２０５３）；ＴＧＦ－β１ ＥＬＩＳＡ 试剂 盒（上海恒远生物科技有限公司，编号：ＡＲ２０９５）；即用型 ＳＡＢＣ 免疫组化染色试剂盒（上海恒远生物科技有限公司，编号：ＳＡ１０２０）；兔抗人细胞角蛋白１８抗体、抗人波形蛋白（上海联硕生物科技有限公司）；兔抗 人 第Ⅷ因子相关抗原抗体（上海联硕生物科技有限公司）；２．５％、４．２５％腹膜透析液２Ｌ（广州 百 特 公 司）；苦参 碱 注 射 液，每 支１５０ｍｇ（１０ ｍＬ），山西振东泰盛制药有限公司，批 号Ｈ２００５９３３５。

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