产品名称：植物维生素D3 ELISA试剂盒

英文名称：Plant Vitamin D3,VD3 ELISA KIT

Elisa实验前的准备
　　1仔细阅读说明书
　　2确定试剂盒在有效期内
　　3按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）
　　4标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份。短期内无法实验者，注意低温保存
　　5准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等
　　6根据检测标本数量确定所需试剂的量
　　7按说明书将所用试剂平衡至室温，配制所需试剂
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　　8选择抗体时选择一个单抗和一个多抗进行配对；若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体；从同一家公司选择抗体对。
　　9ELISA实验中为了确定*信号和zui低背景应将捕获抗体（0.5-4μg/ml）和检测抗体（0.25-2μg/ml）在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
　　10标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。
　　11一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
　　12为了优化灵敏度，建议隔夜孵育标准品和标本。
　　13若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
　　14当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的Ig.

实验过程中加样可能碰到的问题:
1、过长(特别是室内温度较高时)；
2、手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间；
3、加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。.血清或血浆标本分离不好即进行加样。
相应解决办法：
1、标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。
2、加样后及时放入孵箱。
3、加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4、如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5、标本较多时，请分批操作。 

   ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。

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