产品说明: |
Mynox是目前*可杀灭支原体的生物制剂 有效去除细胞培养及病毒保存中支原体的污染 规格:2次,5次,10次
特点:- *杀死支原体
Mynox是*种也是*的以杀死支原体来去除污染的生物试剂。它取自枯草杆菌发酵以后的提取物,基于生物物理原理,特异性的与支原体膜结合,使其通透性改变,导致支原体迅速死亡。 - 对细胞无害
Mynox不会与细胞膜结合,故细胞毒性极低。 - 高效
实验证实,Mynox在三小时左右即可*的去除支原体。 - 非抗生素
无耐药菌株的产生
支原体去除试剂Mynox使用常见问题 Mynox说明书
相关文献:Mynox文献 |
所属公司:德国Minerva Biolabs公司产品 所属类别:支原体检测、去除、预防试剂 |
Mynox® 支原体去除试剂
1. 试剂及材料
1.1 试剂盒组分
操作手册
Mynox试剂:无菌、即用型溶液(PBS缓冲液),PH 7.4,220 µl/管
Cat. No. 10-0200 2 管
Cat. No. 10-0500 5 管
Cat. No. 10-1000 10 管
1.2 稳定性与保存
Mynox在有效期(见包装盒标签)内具有很强的稳定性。应于2-8°C保存。
运输过程中,应保持室温。
1.3 其他所需的试剂及设备
标准细胞培养设备
培养基、胎牛血清、PBS缓冲液、胰酶
无菌培养皿
Venor®GeM支原体检测试剂盒(Minerva Biolabs公司)
2. 应用及原理
不论从生物学还是经济学角度考虑,去除细胞培养中的支原体感染,对于基础研究、诊断和生物技术的生产都是至关重要的。应用抗生素处理是杀灭或抑制细胞培养中支原体污染的zui常用方法。一般来说,抗生素治疗不但不能有效持久地去除支原体,而且,抗生素还容易对细胞产生不良的细胞毒作用,并引起支原体菌株的耐药性。
目前,Mynox是*种也是*可杀灭支原体的生物制剂。实验证实,Mynox仅使用一次即可*有效的消除支原体。
Mynox取自枯草杆菌发酵后的提取物。由于支原体没有细胞壁,只有简单的质膜,因此,Mynox基于生物物理原理,只与支原体膜特异性结合,改变支原体膜的通透性,导致支原体破裂死亡,而细胞膜不与Mynox结合,从而,不会改变细胞的任何特性,故细胞毒性极低。支原体杀死后,细胞能够很快恢复其正常的生长与繁殖状态。
注意:Mynox仅限于基础研究使用。
3. 样品材料
3 .1 血清浓度的重要性
反应混合物中脂肪和蛋白质的浓度可影响Mynox消除支原体的活性,例如:胎牛血清的浓度。这些成分可阻止Mynox与支原体膜的结合。因此,消除细胞培养中的支原体,应使用特定的标准细胞培养基,例如:D-MEM或RPMI 1640培养基。如果使用Mynox消除污染细胞中的支原体,胎牛血清的*浓度为5%。如果使用Mynox消除病毒中的支原体,建议使用无血清的培养基。
3.2 Mynox的使用范围
由于Mynox不与细胞膜结合,因此,它不能消除细胞内的支原体污染。然而,支原体污染通常发生在细胞外,只有penetrans种属的支原体能够进入细胞内,但是,迄今为止,尚未有关于penetrans种属支原体引起污染的报道。另外,为了减小血清对消除支原体的影响,还需制定适用于消除高蛋白、高脂情况下的支原体污染的方案。
Mynox利用生物物理的方法,与支原体膜结合,因此,Mynox必须直接接触支原体,才能有效杀除。我们建议使用胰酶消化细胞,使细胞充分脱落分离,与Mynox充分接触,从而,更有效地杀除支原体。
3.3 Mynox是否对细胞有损伤
同其他消除支原体的产品相比,Mynox对于贴壁和非贴壁系细胞的影响不大。通过对众多细胞系的测试,我们发现治疗后的细胞,不但支原体被*杀除,而且,移种后的细胞仍然能够保持正常的高增殖率。
4. 说明
4.1 贴壁细胞系支原体的去除
4.1.1 污染细胞和Mynox混合物的准备
在直径为6cm的无菌培养皿中,将污染细胞与Mynox混合
1. 加入2.8ml含有5%v/v胎牛血清的标准培养基
2. 加入Mynox 200 µl(1管)
3. 加入2 ml 细胞密度为1x104至 1x105的污染细胞
混合物总体积为5ml。
注意:
1.确保对单一细胞进行支原体杀除(显微镜下观察!)。可根据需要延长胰酶消化时间。
2.在加入污染细胞前,确保Mynox®已被添加在培养基中。将污染细胞直接加入到Mynox混合物中。
4.1.2 去除支原体
在正常细胞培养的条件下,将Mynox与污染细胞的混合物进行2个小时的培养,然后,弃去上清液,再加入标准的细胞培养基。将去除支原体后的细胞继续进行传代培养。
注意:
在污染细胞去除支原体期间,应经常观察Mynox对细胞的影响。如果发现细胞状态不佳,应立即停止反应,添加标准培养基,将Mynox混合物按1:5稀释。
4.2 悬浮细胞系支原体的去除
4.2.1 污染细胞和Mynox混合物的准备
将污染细胞与Mynox混合在无菌离心管中
1. 加入1.6ml 0.125%的胰酶和5mM EDTA PBS缓冲液
2. 加入Mynox 200 µl(1管)
3. 转移1.6 ml含有10%v/v胎牛血清的标准培养基和细胞密度为1x104至 1x105的污染细胞
混合物总体积为3.4ml。
注意:
1.确保对单一细胞进行支原体杀除(显微镜下观察!)。可根据需要延长胰酶消化时间。
2.在加入污染细胞前,确保Mynox®已被添加在培养基中。将污染细胞直接加入到Mynox混合物中。
3.确保离心管中污染细胞与Mynox的混合物为液态。
胰酶可防止细胞聚集。如果,去除支原体过程中,不需要使用胰酶进行细胞分离,可添加PBS缓冲液,以保证细胞与Mynox混合物的总体积为3.4 ml。
4.2.2 去除支原体
1. 室温下,轻轻摇匀混合物2小时。
2. 将细胞团离心5分钟 (600 x g) 并弃去上清液。
3. 在不含Mynox的培养基中将细胞重悬。
去除支原体更有效的方法是:将污染细胞在含有Mynox的培养基中培养1代。将污染细胞加入到5 ml含有5 % v/v 胎牛血清的培养基和150 µl Mynox的混合物中培养3天,然后,离心并弃去上清液,再继续在不含Mynox的培养基中进行传代培养。
注意:
在污染细胞去除支原体期间,应经常观察Mynox对细胞的影响。如果发现细胞状态不佳,应立即停止反应,添加标准培养基,将Mynox混合物按1:5稀释。
4.3 无包被病毒支原体的去除
4.3.1 污染细胞和Mynox混合物的准备
冻存或新鲜的细胞以及不含细胞碎片的悬浮液均可进行支原体杀除。病毒的滴度不影响去除效果,将污染细胞与Mynox混合在15ml无菌管中:
将污染细胞与Mynox混合在无菌离心管中
1. 加入1ml不含胎牛血清的标准培养基
2. 加入Mynox 100 µl
3. 将125 µl病毒株和8%v/v的胎牛血清加入到上述混合液中
混合物总体积为1.225 ml。
注意:
确保反应管中污染细胞与Mynox的混合物为液态。
4.3.2 去除支原体
1. 将污染细胞与Mynox的混合物室温下培养2小时,并轻轻摇匀。
2. 在培养基中,将Mynox稀释为1:10时,反应结束。
在进行此步骤时,可以通过去除宿主细胞系的支原体污染,同时达到去除病毒中支原体污染的目的。zui后的体积应达到混合液体积的10倍。
注意:
在被支原体污染之前,首先要检测宿主细胞系是否有支原体污染。
4.4 包被病毒支原体的去除
包被病毒外层的脂质膜成分与支原体膜相似,也是Mynox结合的对象。根据使用Mynox的浓度和作用时间,这些病毒极易被Mynox杀除。为了能够*杀除支原体,预杀除支原体的病毒的滴度应高于106 TCID50。
4.4.1 污染细胞和Mynox混合物的准备
冻存或新鲜的细胞以及不含细胞碎片的悬浮液均可进行支原体杀除。将污染细胞与Mynox混合在15ml无菌管中:
1. 加入4.4ml不含胎牛血清的标准培养基
2. 加入Mynox 100 µl
3. 将0.5 ml病毒株和8%v/v的胎牛血清加入到上述混合液中
混合物总体积为5 ml。
注意:
确保反应管中污染细胞与Mynox的混合物为液态。
4.4.2 去除支原体
将污染细胞与Mynox的混合物室温下培养2小时,并轻轻摇匀。在培养基中,将Mynox稀释为1:10时,反应结束。在进行此步骤时,可以通过去除宿主细胞系的支原体污染,同时达到去除病毒中支原体污染的目的。zui后的体积应达到混合液体积的10倍。
注意:
在被支原体污染之前,首先要检测宿主细胞系是否有支原体污染。这个支原体去除过程,可多次用于病毒株的杀除,以确保所有支原体已被杀除。
5. 支原体检测
在不添加抗生素的情况下,经Mynox去除的细胞培养物和病毒株应继续传代培养4代,然后,进行支原体污染的再测定。我们建议使用高敏感度的Venor®GeM支原体检测试剂盒(Cat.-No. 11-1025/1050/1100/1250),以测定支原体去除的效果。该试剂盒应用的PCR检测法,但是,去除支原体后,不宜立即采用PCR检测。因为,Mynox可改变支原体膜的通透性,使支原体破裂死亡,进而,达到杀除支原体的目的,同时,支原体DNA也会释放到培养基中,此时,应用PCR法检测,就可检到支原体DNA,从而,造成错误的阳性结果。在继续传代培养1-2代后,由于培养基的更换,细胞外不再含有支原体DNA。