DNA/RNA提取试剂盒说明书

AllPureDNA/RNAKit

DNA/RNA提取试剂盒说明书

Cat.No.  K0590 

  保存：室温

组分说明

                                              Cat.No.               K0590



                                              KitSize                  50

                                            BufferRL                35ml

                                            BufferRW1                40ml

                                   BufferRW2（concentrate）           11ml

                                         RNase-FreeWater             10ml



                                    BufferGW1（concentrate）           13ml

                                   BufferGW2（concentrate）           15ml

                                             BufferGE                15ml



                                         SpinColumnDM                 50

                                        SpinColumnRM                 50

                                     CollectionTube（1.5ml）           100

                                     CollectionTube（2ml）            150

产品简介

      本试剂盒可用于从同一细胞或组织样本中同时纯化基因组 DNA 和总 RNA。由于不需要将样本分成两份用于不同的纯化步骤，该试剂盒可最大限度的回收 DNA 和 RNA。纯化的 DNA 和 RNA 被单独洗脱并可直接用于各种下游实验。本试剂盒中不包含苯酚和氯仿等有毒物质，无需乙醇沉淀，操作简单、快捷。基因组 DNA 可用于 PCR、Real-timePCR、SouthernBlot、DotBlot、比较基因组杂交（CGH）、基因分析和 SNP 分析；总 RNA 可用于 RT-PCR、Real-timeRT-PCR、cDNA 的合成、NorthernBlot、DotBlot 等分析。

注意事项

1.   预防RNase污染，应注意以下几方面：

1) 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

2) 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分钟，用水*冲洗后高压灭菌。

3) 配制溶液应使用RNase-FreeWater。

4) 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

2.   样品应避免反复冻融，否则影响提取DNA和RNA的质量。样品在BufferRL中，可于-70℃保存一个月。

3.   BufferRL在使用前请加入β-巯基乙醇，1mlBufferRL加10 μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的BufferRL室温可保存1个月。

4.   第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在 BufferRW2、BufferGW1 和 BufferGW2 中加入无水乙醇。

5.   使用前请检查 BufferRL 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请于 56℃水浴重新溶解。

6.   所有离心步骤均使用台式离心机，室温下进行。

自备试剂：β-巯基乙醇（新开封或提取 RNA 专用）、70%乙醇（用无 RNase 的水配制）、无水乙醇

操作步骤

1.   材料处理

    1a. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液（最大提取量为10⁷ 个细胞）, 收集细胞，弃尽培养液，加入600μlBufferRL（用前检查是否加入β-巯基乙醇），反复吹打使其充分裂解。

 注意：一定要弃尽培养液，否则影响裂解和后续的核酸纯化步骤。

    1b. 取不大于30mg的动物组织，液氮研磨成细粉末，加入600μlBufferRL（用前检查是否加入β-巯基乙醇），或直接加入600μlBufferRL（用前检查是否加入β-巯基乙醇），匀浆处理。

         注意：匀浆要充分，否则影响RNA产量。

2.   将上步所得溶液12,000rpm（～13,400×g）离心3-5分钟，小心的将上清加入到已装入收集管（2mlCollectionTube）的吸附柱（SpinColumnDM）中，12,000rpm离心30-60 秒，收集滤液。将吸附柱DM放在一个新的2ml收集管

     （2mlCollectionTube）中，室温或4℃放置，待提DNA。

     注意：确保吸附柱 DM上没有液体残留，如果有必要可以重复离心，直至所有的液体通过吸附柱DM的膜。总RNA提取

3.   向步骤2所得滤液中加入1倍体积的70%乙醇（无RNase的水配制），混匀。

4.   将上步所得溶液全部加入到已装入收集管（2mlCollectionTube）的吸附柱（SpinColumnRM）中，若一次不能全部加完溶液，可分次转入。12,000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回2ml收集管中。

5.   向吸附柱RM中加入700 μlBufferRW1,12,000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回2ml收集管中。

6.向吸附柱RM中加入500 μlBufferRW2（使用前检查是否已加入无水乙醇）,12,000rpm离心20秒, 倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回2ml收集管中。

7.   重复步骤6。

8.   12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟，以*晾干。

     注意：此步骤目的是去除吸附柱RM中残余的乙醇，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。

9.   将吸附柱RM置于一个新的无RNase1.5ml离心管（CollectionTube1.5ml）中，向吸附柱RM的中间部位加入30-50μlRNase-FreeWater，室温放置2-5分钟，12,000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。

注意：1）RNase-FreeWate体积不应小于30 μl，体积过小影响回收率。

    2）如果要提高RNA的产量，可用30-50 μl新的RNase-FreeWater重复步骤9。         

3）如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤9。

基因组DNA 提取

10.  向吸附柱 DM 中加入 500 μlBufferGW1（使用前检查是否加入无水乙醇）,12,000rpm  离心 20 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 DM 放回 2ml 收集管中。

11.  向吸附柱DM中加入500 μlBufferGW2（使用前检查是否已加入无水乙醇）,12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱DM放回2ml 收集管中。

12.  12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱DM置于室温数分钟，以*晾干。

     注意：这一步的目的是将吸附柱DM中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。

13.  将吸附柱DM置于一个新的无RNase1.5ml离心管（CollectionTube1.5ml）中，向吸附柱DM的中间部位加入100 μlBufferGE，室温放置2-5分钟，12,000rpm离心2分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

注意：1）BufferGE的体积不应小于100 μl，体积过小影响回收率。

   2）如果要提高DNA的产量，将100 μl新的BufferGE加至吸附柱上，重复步骤13。

3）如果要提高DNA浓度，可以将步骤15所得的DNA洗脱液重新加至吸附柱上，重复步骤13。

附表 1 吸附柱 DM 和吸附柱 RM 的规格说明

规格                   吸附柱 DM                 吸附柱 RM

最大结合能力          100µgDNA            100µgRNA

最大加样量               700µl               700µl

结合核酸分子量         DNA15–30kb         RNA>200 核苷酸

最小洗脱体积              100µl                30µl

  

从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验外包及论文润色服务，协助客户各类实验服务及论文润色，是客户您值得信赖的科研合作伙伴!

如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究，欢迎您与我们联系。

实验代做服务：