猪乙型脑炎病毒抗体（IgG）诊断试剂盒（酶联免疫法）

说明书

【产品名称】

通用名称：猪乙型脑炎病毒抗体（IgG）诊断试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab

【规格】

96×2测试/盒

【预期用途】

 本试剂盒用于定性测定猪血清中日本乙型脑炎病毒（又称流行性乙型脑炎）IgG抗体。用于评估猪场猪乙型脑炎病毒疫苗免疫状况，感染猪的血清学诊断以及猪乙型脑炎病毒的流行病学调查。

【检验原理】

 本试剂盒应用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，由包被有高纯度的猪乙型脑炎抗原的微孔反应板、辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG及其它试剂配套组成。其反应机理为包被抗原与样本中的JEV-IgG结合，再与酶标抗猪IgG抗体形成“包被抗原+JEV-IgG+酶标抗猪IgG抗体”复合物，加入显色剂，通过酶催化反应显色。显色深浅与JEV-IgG的量成正比，当显色超过设定的临界值时结果判为阳性，表明免疫有效或有自然感染。

【要组成成份】`

【自备器材】

1．酶标仪（ 450nm  630nm滤光片）

2．微量移液器（单道1-100ul、0.5-10ul、多道      30-300ul）

3．水浴箱或恒温箱

4．微量振荡器

5．一次性枪头（10ul、200ul）

6．去离子水

【样本要求】

1．本试剂检测的样本为猪血清，样本应无菌采集，2℃～8℃贮存不超过一周，长期应在-20℃以下保存，避免反复冻融。

2．避免使用严重溶血、有沉淀物、含悬浮纤维蛋白及污染长菌的样本。

【实验准备】

1．试剂盒组分回温平衡:试剂盒组分在实验前，先取出置室温30min。酶标板应在室温中平衡至潮气干尽后方可拆开。

2．样本稀释：用试剂盒提供的样本稀释液将样本作40倍稀释（例：将5ul样本加至195ul样本稀释液中）。

3．配制洗涤液：将试剂盒所提供浓缩洗涤液直接用去离子水稀释20倍（例：将50ml洗涤液加入950ml去离子水中）。若20倍浓缩洗涤液出现结晶，属正常现象，放置37℃至溶解后即可。

【操作步骤】

1．加样：根据样本数量，取所需板条。设阴、阳性对照各2孔，分别加入不稀释的阴、阳性对照血清100μl于相应孔中。其余为样本孔，每孔加入稀释好的样本100μl。

2．温育：加样后，盖上盖板膜，置37℃温育30分钟。

3．洗板：甩去孔内液体，用洗涤液注满反应板孔，洗涤3次，每次停留10秒，后一次洗后拍干。

4．加酶：每孔加酶标记物100μl。

5．温育：加好酶标记物后，盖好盖板膜，置37℃温育30分钟。

6．洗板：同步骤3。

7．显色：每孔加显色剂100μl，振荡混匀，37℃避光反应10分钟。

8．终止：每孔加终止液50μl，振荡10秒，充分混匀。终止后即读数。

9．读数：以450nm/ 630nm双波长检测，读取各孔吸光度值（OD值）。

【结果判定】

在酶标仪上测各孔的OD值。检测结果有效的条件是阳性对照孔的平均OD值≥0.6，阴性对照孔的平均OD值必须＜0.1。

样品中抗体存在与否，或样本中抗体的相对水平的高低由S/P值决定，S/P值计算时按以下方式处理:

  S/P=(样本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示阴性对照孔平均OD值（0.05以下的数值按0.05计算），PCx(—)表示阳性对照孔平均OD值；

当样本的S/P≥0.25时判为阳性；样品S/P值＜0.25时判为阴性。

【注意事项】

1．本试剂盒仅用供研究使用。

2．使用试剂盒之前，一定要仔细阅读说明书。

3．实验废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

4．未用完的微孔板须放回有干燥剂的铝箔袋并密封4℃保存。未用完的液体试剂应盖好瓶盖，与其它配套组份放入试剂盒中于2℃-8℃避光保存。不同批号的试剂组份不可混用。

5．应用微量移液器加入样本及试剂，并经常校对其准确性。

6．加洗涤液时应做到满而不溢，防止孔口有游离酶不能洗净或各孔间的交叉污染。

7．终止液有腐蚀性，若溅到皮肤或衣物上应立即用大量清水冲洗干净。

【储存条件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷冻，有效期12个月。

【生产日期及批号】

详见包装袋和外包装盒。

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