犬狂犬病毒抗体检测试剂盒

使用说明书

【介绍】

狂犬病毒（Rabies virus, RBV）抗体检测试剂盒用于检测猫、犬等动物血清中的狂犬病毒抗体，用于评估狂犬病毒疫苗免疫状况。

本试剂盒采用阻断ELISA法，在酶标板条微孔上预包被狂犬病毒抗原。在试验中，加入稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有狂犬病毒特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标的抗狂犬病毒单抗，样本中的抗体阻断了单抗与包被板上抗原的结合；经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔中加入TMB底物液，经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

【组份】

【需自备的设备及试剂】

• 微量移液器：10µl-100µl、100µl-1000µl。
• 一次性移液器吸头。
• 量筒：500ml。
• 96孔板酶标仪。
• 蒸馏水或去离子水。
• 洗瓶或洗板机。

【样品制备】

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

【洗涤液的准备】

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

【注意事项】

• 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。
• 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
• 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。
• TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
• 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。
• 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
• 严格遵守操作说明可以获得H的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精q。
• 抗原包被板为一次性用品，不得重复使用； 

【操作步骤】

• 每次试验均设置空白孔1孔、阳性对照1孔、阴性对照2孔，阴性对照、阳性对照直接取100ul/孔加入孔内；
• 将样品稀释液按90ul/孔加入到微孔反应板内，之后将待检样品血清按10ul/孔加入孔内并吹打混匀（移液器枪头请勿混用）；
• 盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育60分钟。
• 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上步骤重复4-6次，后在干净吸水纸上拍干。
• 除空白对照孔外，每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。
• 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤4-6次, 方法同4。切记后在干净吸水纸上拍干。
• 每孔加显色液100µl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。
• 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

【结果判定】

以空白对照调零用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度A值。

试验成立的条件是：

N值>0.5、同时阳性对照(P)阻断率>50%；

计算方法：

PI (阻断率)=  1 —（样品OD值 / 阴性OD均值）

阴阳性判断：

PI(阻断率)>40%则判断为阳性；

PI≤40%则判断为阴性。

注：（PI=40%相当于抗体滴定度0.5IU/ml)

【有效期】

贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。

有效期： 12个月。

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