预包被 96 孔微孔板

标准

标准稀释缓冲液

洗涤缓冲液

检测试剂A

检测试剂B

稀释剂A

稀释液B

TMB底物

停止解决方案

封板机

37°C培养箱

多道和单道移液器以及无菌移液器吸头

喷射瓶或自动微孔板清洗机

1.5毫升管

蒸馏水

吸附滤纸

100 毫升和 1 升量筒

酶标仪（波长：450 nm）

ELISA 摇床

1) 标准品：用推荐体积的标准品稀释缓冲液配制标准品，制成标准品溶液。然后按照实验方案中的说明，使用标准稀释缓冲液对标准溶液进行系列稀释。

2) 洗涤缓冲液：按照实验方案中的说明，用蒸馏水稀释浓缩的洗涤缓冲液。

3) 检测试剂配制：计算所需工作液的总体积。分别用稀释液A和稀释液B按1:100稀释检测试剂A和检测试剂B。

1) 设置标准品、测试样品和对照孔。

2) 将 50 µl 稀释标准品等分到标准孔中。

3) 将 50 µl 标准稀释缓冲液等分到对照（零）孔中。

4) 将 50 µl 稀释样品等分到样品孔中。

5) 立即向每个孔中分装 50 µl 检测试剂 A。 37°C 孵育 1 小时。

6）洗涤3次。

7) 将 100 µl 检测试剂 B 分装到每个孔中。 37°C 孵育 30 分钟。

8）洗涤5次。

9) 将 90 µl TMB 底物等分到每个孔中。 37°C 孵育 10-20 分钟。

10) 等分 50 µl 终止液。

11) 测量 450 nm 处的 OD。

使用前将套件组件和样品平衡至室温 (18 - 25 °C)。建议为每次测试绘制标准曲线。

1. 在预涂板上分别设置标准孔、测试样品孔和对照（零）孔，然后记录它们的位置。建议测量每个标准品和样品至少一式两份。

2. 将 50 µL 每种标准品、对照品和样品添加到相应的孔中。

3. 取下盖子并倒掉液体。

4. 立即分装 50 µl 检测试剂 A 工作溶液。用盖子密封板并在 37°C 下孵育 1 小时。

5. 取下盖子并丢弃溶液。用 1X 清洗缓冲液清洗板 3 次。

6. 每孔加入100 µL 检测试剂B 工作液，密封并在37°C 下孵育30 分钟。

7. 弃去溶液并按照上一步骤中的说明用洗涤缓冲液洗涤板 5 次。

8. 将 90 µl TMB 底物等分到每个孔中。用盖子密封板并在 37°C 下孵育 10-20 分钟。避免暴露在光线下。孵育时间仅供参考，很佳时间应由很终用户确定。不要超过 30 分钟。

9. 在每个孔中添加 50 µL 终止溶液。立即在 450 nm 处读取。