总RNA提取：

A组织样本：迅速将新鲜的组织切成合适的大小，在液氮中充分研磨后加裂解液裂解，或直接加入裂解液后用匀浆器匀浆。每30-50mg组织加1ml Trizol。

B全血样品：加入3-5倍体积的红细胞裂解液到血样中，室温孵育10min，室温3500rpm离心6min。弃上清，原每2-3ml全血样品加1mL Trizol。

C细胞样品：悬浮液中生长的细胞，通过离心收集细胞后，每1×105〜106细胞加入1mL Trizol，移液器吹打混匀，直接裂解或-80℃储存一个月。贴壁生长的细胞，有两种处理方法。一种是移除培养基后，将1mL Trizol直接加入直径3.5cm的培养皿中裂解细胞。或是先用胰蛋白酶将贴壁细胞消化下来并收集后，再加入1mL Trizol进行裂解。（Note：加入Trizol前, PBS充分洗涤细胞去除残余培养基。）荧光定量PCR(SYBR Green)总RNA提取方法步骤如下：

1、直接法

1）加入1ml Trizol试剂，混匀，冰上孵育10min。

2）4℃，12000rpm离心10min，小心转移上清液到不含颗粒的新EP管中。

3）加入200ul氯仿，剧烈振荡15秒，室温孵育5min。

4）4℃，12000rpm离心15min。混合液分三层，包括最下面的苯酚 - 氯仿有机相，中间相和上层水相。小心转移上层水相到新的EP管（大约60％体积的Trizol），不要吸取中间相，可留下少量上层液体！（Note：质量比数量更重要！）

5）加入等体积的异丙醇，轻轻地颠倒混匀约10次，室温放置10min。

6）4℃，12000rpm离心10min。弃上清，1ml 75％乙醇洗涤RNA沉淀两次。

7）4℃，12000rpm离心5min，弃上清，室温下风干5-10min（不要太干，过度干燥会导致RNA难溶解！）。将RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。

8）立即进行反转录反应，或先-80℃长期保存。

2、离心柱法(依据RNA提取试剂盒说明书)

1）1、中步骤1）—4）。

2）加入1/2体积的无水乙醇，轻柔颠倒混匀。如有透明的纤维状物体，不影响下游步骤。

3）将所有裂解物/乙醇混合物转移至离心柱，置于2mL，静置2min。4℃，12000rpm离心3min，弃废液。

4）加入500uL洗涤液，静置2min。4℃，12000rpm离心30秒，弃废液。重复一次。

5）4℃，10,000rpm离心2min以除去残留的乙醇。

6）将离心柱置于新的RNase-free EP管中，加入30ul-50ulDEPC水，静置5min， 12000rpm离心2min收集。

7）立即进行反转录反应，或先-80℃长期保存。