兔骨骼肌成纤维细胞
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兔骨骼肌成纤维细胞

参考价: ¥7750

具体成交价以合同协议为准
2024-01-29 15:32:11
1068
属性:
供货周期:现货;规格:5×105cells/T25细胞培养瓶;货号:A01X2143;主要用途:仅供科研研究实验;组织来源:腿部肌肉;种属来源:兔;生长特性:贴壁;细胞形态:长梭形细胞,不规则细胞;
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规格:
5×10^5;
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产品属性
供货周期
现货
规格
5×105cells/T25细胞培养瓶
货号
A01X2143
主要用途
仅供科研研究实验
组织来源
腿部肌肉
种属来源
生长特性
贴壁
细胞形态
长梭形细胞,不规则细胞
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兔骨骼肌成纤维细胞

参考价: ¥7750

5×10^5 7750元 15 瓶可售
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上海抚生实业有限公司

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产品简介

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详细介绍

一、细胞基本属性:

细胞名称

兔骨骼肌成纤维细胞

商品货号

A01X2143

组织来源

腿部肌肉

产品规格

5×105cells/T25细胞培养瓶

种属来源

传代特性

根据细胞特性

生长特性

贴壁

细胞形态

长梭形细胞,不规则细胞

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细胞简介

肌肉可分为肌腹和肌腱,其中两端较细呈乳白色的部分为肌腱,呈索条或扁带状,由平行的胶原纤维束构成,色白,有光泽,但无收缩能力,腱附着于骨处与骨膜牢固地编织在一起,属于结缔组织,同时,肌腹的表面包以结缔组织性外膜,向两端则与肌腱组织融合在一起,这些结缔组织是由成纤维细胞构成,具有支持、连接、保护和营养功能。

包被条件: 

培养基:原代成纤维细胞培养体系

换液频率:每2-3天换液一次

传代比例:

消化液:0.25%胰蛋bai酶

培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%

QQ截图20240123162116.png
原代细胞实验步骤:

一、取7-10d雄性SD大鼠,颈椎脱臼处死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

二、在超净工作台中,将大鼠断头置于玻璃培养皿中,打开颅腔后取出全脑,放在盛有预冷的PBS玻璃培养皿中,去除小脑和间脑。

三、将大脑半球在干滤纸上缓慢滚动以去除软脑膜和脑膜大血管,再放在新的盛有预冷的PBS玻璃培养皿中。

四、用细解剖镊去除大脑白质、残余大血管和软脑膜,保留大脑皮质。

五、大脑皮质放于DMEM中,剪碎成约1mm3大小,放入50ml的离心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型胶原酶,0 .025-0 .05%IV型胶原酶,200-400U DNaseI),混匀后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室温1 000×g离心8min,去上清液。

七、沉淀中加入20%BSA重悬浮,充分混匀,1 000×g,20min,4℃离心,去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的胶原酶/分散酶,0.05-0.1%I型胶原酶,100-300U DNaseI )重悬浮,混匀,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室温离心6min,去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培养液悬浮混匀,铺于经离心形成连续梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃离心10min。

十、靠近底部的红细胞层之上的白黄色的层面即为纯化的微血管段,吸出后DMEM

漂洗两次(离心1000×rpm,6min,室温),去上清液。

加入DMEM培养液(20%FBS,4ug/ml嘌呤霉素 )重悬浮,接种于含5%的大鼠 血清37℃孵育过夜所制备的细胞培养皿中,置于37℃、5%CO2培养箱内静置培养24h后更换不含嘌呤霉素的混合培养基,随后隔天换液。

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原代细胞使用方法:

是一种贴壁细胞,细胞形态呈长梭形细胞,不规则细胞,在技术部标准操作流程下,细胞可传2-3代;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。

1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。

2. 贴壁细胞消化

1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;

2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml培养基终止消化;

3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;

4)待细胞贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的培养基。

3. 细胞收货脱落

1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;

2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化;

3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml培养基重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;

4)待细胞贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。

5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。

4. 细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。


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