谷类豆类基质多真菌毒素LC-MS/MS分析方法
时间：2022-11-15 阅读：1189
| 步骤 | GB 5009.111-2016 传统SPE柱法净化（呕吐毒素） | GB 5009.22-2016 黄曲霉毒素免疫亲和柱 | GB 5009.96-2016 赭曲霉毒素A免疫亲和柱法 | FaTEx 多真菌毒素专用SPE柱法 |
| 1 | 称取2g样品，于50mL离心管中 | 称取5g样品，于50mL离心管中 | 称取25g样品，加入5g氯化钠 | 1、称取2g样品，于50mL离心管中 |
| 2 | 加内标溶液，静置30min | 加内标溶液，静置30min | 用提取液Ⅰ定容到100mL，混匀 | 2、加入 12mL 70%酸化乙腈溶液 |
| 3 | 加入20mL乙腈-水溶液，涡旋混匀 | 加入20mL乙腈-水溶液，涡旋混匀 | 高速均质2min | 3、高速振荡30min |
| 4 | 超声或涡旋振荡20min | 超声或涡旋振荡20min | 用定性滤纸过滤 | 4、离心5min，取5mL上清液到FaTEx SPE柱内 |
| 5 | 离心5min，取5mL上清液 | 离心10min，取4mL上清液 | 移取10mL滤液于50mL容量瓶 | 5、以每秒1滴过柱，收集滤液 |
| 6 | 加入10mL乙腈饱和正己烷溶液 | 加入46mL 1% Trition X-100的PBS，混匀得到样液 | 加水定容至刻度，混匀 | 6、取1.2mL滤液浓缩至近干 |
| 7 | 涡旋2min | 将低温保存的免疫亲和柱恢复至室温，将原有液体流尽 | 经玻璃纤维滤纸过滤澄清，收集滤液A于容器 | 7、以1mL50%乙腈-水溶液回溶 |
| 8 | 离心2min，弃去正己烷层 | 将上述样液以1-3mL/min的速度通过免疫亲和柱 | 移取10mL滤液A，以每秒1滴通过免疫亲和柱 | 8、过滤膜，上机到LC-MS/MS分析 |
| 9 | 氮吹近干，加入4mL水复溶为溶液A | 用20mL水淋洗免疫亲和柱 | 用10mLPBS缓冲液通过亲合柱 | |
| 10 | 用3mL甲醇和3mL水活化平衡SPE柱 | 水滴完后，抽干亲和柱 | 用10mL水淋洗亲和柱 | |
| 11 | 将4mL溶液A上柱，每秒1-2滴 | 加入2mL甲醇洗脱亲和柱，1-3mL/min的速度 | 弃去流出液，抽干亲和柱 | |
| 12 | 用3mL谁淋洗SPE柱 | 再次抽干亲和柱 | 以5mL甲醇洗脱2次，收集洗脱液 | |
| 13 | 用1mL5%甲醇-水溶液淋洗SPE柱 | 收集全部洗脱液到试管中，氮吹至近干 | 氮吹近干 | |
| 14 | 抽干SPE柱，用4mL甲醇洗脱 | 用1mL初始流动相复溶 | 以1mL乙腈-水溶液复溶 | |
| 15 | 收集全部洗脱液后，氮吹近干 | 过滤膜，上机到LC-MS/MS分析 | 过滤膜，上机到LC-MS/MS分析 | |
| 16 | 用1mL初始流动相复溶 | |||
| 17 | 过滤膜，上机到LC-MS/MS分析 | |||
| 小结 | GB 5009.111-2016 传统SPE柱法净化（呕吐毒素） | GB 5009.22-2016 黄曲霉毒素免疫亲和柱 | GB 5009.96-2016 赭曲霉毒素A 免疫亲和柱法 | FaTEx 多真菌毒素专用SPE柱法 |
| 目标物 | 呕吐毒素（1种） | 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2（4种） | 赭曲霉毒素A（1种） | 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，赭曲霉毒素A，呕吐毒素，玉米赤霉烯酮，伏马毒素B1、B2，T-2毒素，HT-2毒素（11种） |
| 基质 类型 | 谷类及制品、酱及制品 | 谷类及制品、豆类及制品、坚果及籽、油脂及制品、调味品等 | 玉米、小麦等粮食 | 谷类、米类、玉米、花生、花生酱 |
| 前处理 | 传统呕吐毒素SPE柱法净化法 1、一次净化测试 1种毒素2、液液萃取操作，多做一次溶剂转换 3、传统SPE柱需要活化、淋洗和洗脱 | 免疫亲和柱法前处理 1、一次净化测试 4种毒素2、低温储运，恢复常温后使用 3、需要淋洗、抽干和洗脱 | 免疫亲和柱法前处理 1、一次净化测试 1种毒素2、低温储运，恢复常温后使用 3、需要淋洗、抽干和洗脱 | FaTEx 真菌毒素专用SPE柱 1、一次净化测试 11种毒素（包括但不限于）2、常温使用 3、操作步骤简化 |
| 效率 | 5-6小时/每批20个样品 | 4小时/每批20个样品 | 4小时/每批20个样品 | 1小时/每批20个样品 |
| 参考资料： | ||||
| 1、GB 5009.111-2016 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定 | ||||
| 2、GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定 | ||||
| 3、GB 5009.96-2016 食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测定 | ||||
| 4、以FaTEx-gen快速净化萃取套组搭配液相层析串联质谱分析谷类样体中之多重霉菌毒素应用方案 | ||||