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面议RVG29/Pep-1-peg-HRP 辣根过氧化氢
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RVG29/Pep-1-peg-HRP 辣根过氧化氢
介绍:过氧化物,通常来源于辣根(因此称辣根过氧化物),是检验试剂中的。该产品不但用于多个检测,也运用于类(ELISA)试剂盒。过氧化物作为多个试剂盒显色体系的关键成分,对试剂盒的质量有影响。
过氧化物催化以下反应: 2 H2O2 →O2+2H2O 这一类以铁卟啉为辅基,所以属血红素蛋白质类(hemeProteins)。过氧化物在生物界分布广,在的氧化还原过程中起的作用。 是以辣根为,经过水的抽提,硫酸铵和丙酮分级分离,再经锌离子纯化,透析除盐,冷冻干燥,后制得的辣根过氧化物。 辣根过氧化物分子量在40,000左右,是一种含亚铁血红素的蛋白质,等电点7.2;易溶于水,溶解度为5%(W/V),溶液呈棕红色,透明;也溶于0.58饱和度以下的硫酸铵溶液,而0.62饱和度以上则不溶。该适pH为7.0(对愈创木酚为氢给体而言)。在室温下HRP在几周内保持稳定,加热到63℃后15分钟内稳定。 辣根过氧化物氧化还原电势很低,pH6.08时,E’0= -0.2070v;pH为7.71时,E’0= -0.5787v。 辣根过氧化物的作用机理可分以下几步: 一,形成绿色有活性的一底物复合物Ⅰ: 一、二步,复合物Ⅰ转变成红色有活性的复合物Ⅱ: 复合物Ⅰ+AH→复合物Ⅱ+A 第三步,复合物Ⅱ被还原,释放出: 第三步 AH:表示还原型氢供体。 在一定程度上复合物Ⅱ可自发地分解成HRP和产物(P),亦可与过量的过氧化氢形成无活性的复合物Ⅲ。
1) RZ>3 活性 >250u/mg, 主要应用于学,是的过氧化。采用色谱纯化技术以除去会影响学反应的同工B .
2) RZ>2 活性 >180u/mg ,主要应用于化学,我们的客户也有将这个规格的产品应用于学研究的。此时,一个标准化的分析方法就变得尤为。
3) RZ>1 活性 >100u/mg,主要应用于血糖试纸和尿液分析试纸。
4) RZ>0.6 活性 >60u/mg ,主要应用于尿液分析试纸。
辣根过氧化物的活力测定方法有多种,主要原理介绍如下:
1、Rz值,提纯工作的后几步以及纯溶液可用Rz值表明的纯度。
403nm处的吸收代表血红素辅基的吸收,275nm的吸收是蛋白质的吸收,结晶的HRP的Rz值为3.04。测定时的浓度为1毫克蛋白/毫升。
2、愈创木酚法:测k4[见反应式⑶]。以愈创木酚(邻甲氧基酚,guaiacol)为氢给体,其反应如下:
四邻甲氧基连酚有色产物四邻甲氧基连酚(E470nm = 26.6mM-1·cm-1)生成的速度(dx/dt)与底物过氧化氢以及氢供体愈创木酚的浓度有关。方程如下:
e—浓度;
α0—氢供体起始浓度;
x0为过氧化氢的起始浓度。
如果测定的条件选择成k4α0》k1x0,可以测得k1:
所以
所以:
—测定过程中底物减少的速度。
是采用测定k4的方法来判断的纯度。
上述测定Rz值和k4值的方法虽然比较简单,但都不能测得的实际活力单位。测定过氧化物的传统方法是连苯三酚试验法,以过氧化氢为底物,在作用下,连苯三酚可形成红棓酚(Purpurogallin),在430nm处测定产物的形成。用红棓酚值(PZ)表示的活力。PZ表示在标准测定条件下1毫克所形成的红棓酚微克数。
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