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胎牛血清(Foetal Bovine Serum,简称FBS):是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。此时胎牛各脏器正处生长分化阶段,血中含有丰富的生长发育因子,非常适合各种细胞的培养,一旦胚胎发育,这些因子自动消失。因此8个月胎龄以上的牛胚胎,已接近足月,不能作为胎牛血清的原料来使用。
新生牛血清(Newborn Calf Serum,简称NBCS):采自出生一天~一周内的新生牛;
小牛血清(Calf Serum):采自出生10-30天的小牛;
成牛血清(Adult Bovine Serum,简称ABS):采自成年牛收全血后分离得到血清。
所有血清出厂前均应经过严格质控,并附详细《检测报告》,
如pH值、渗透压、内毒素、病毒检测、促细胞生长能力、无菌等检查。
其中,由于内毒素直接参与细胞凋亡,对细胞培养结果影响较大,且不同批次的血清,内毒素差异又不易控制。
内毒素含量越低的血清,级别就越高,以胎牛血清为例:
当血清中内毒素含量≤10EU/ml时,此血清为特级胎牛血清;
当血清中内毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml时,此血清为优级胎牛血清;
当血清中内毒素含量≥ 25EU/ml时,此血清为标准级胎牛血清;
胎牛血清 在细胞培养中的作用:
1. 提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调节它们所结合的物质活力。
3. 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
4. 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5. 起酸碱度缓冲液作用。
6. 提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余yi dan bai mei失活,保护细胞不受伤害。
7. 参与细胞冻存。
在细胞培养中,胎牛血清加入基础培养基的浓度大多为5%~20%(最常见为10%)的。具体到不同试验,应依据文献报导,或细胞类型或基础培养基的成分来确定最佳浓度。
胎牛血清产品描述:
胎牛血清,是由胎牛血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,其组成成份大部分已知,但还有一部分尚不清楚,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。其中不含细胞、纤维蛋白
胎牛血清在细胞培养方面通常优于其他类型的血清。由于胎牛从未接触过外界, 与新生牛和小牛血清相比,抗体含量明显降低,故抗体与培养细胞发生交叉反应的风险也较低,是理想的细胞生长补充剂。
所有胎牛血清均在当地政府兽医部门的监督下从注册的出口屠场采集,符合国际动物协会要求。
为避免不同供体间的个体差异,能够更好保证实验数据的连续性和稳定,应使用同批次血清。
同批次血清:将经过初步检测合格的很多供体胎牛的粗血清,混合在一起,在低温条件下,经七次加压过滤,最后三次为0.1 µm无菌过滤处理,得到浅黄色,澄清,稍粘稠液体。同一批次血清质量上基本无差异。不同厂家一个批次产量差异较大,从100升到2000升不等。批次大,更利于试验的稳定和连续的可参照性。
所有血清出厂前,均经过严格质控,每个批次附有详细完整的《检测报告》,包括:品名,货号,批号,血源地,生产日期,保质期,pH值、渗透压、血红蛋白、总蛋白、球蛋白、IgG、内毒素、无菌检查(细菌、真菌、支原体)、病毒检查(如BVD、牛腺病毒、细胞病变效应等)、促细胞生长能力、细胞毒性、BVD-1/2抗体检查等。
胎牛
血清储存条件:
-20°C冻存。
胎牛血清解冻后,应按单次习惯用量分装,分装后的血清仍-20°C冻存。
若置于4°C的血清,应在一周内用完。
为保证细胞培养的最佳效果,血清和培养基的配置,应遵循“现用现配"原则。配好的培养液,应于一周内用完。
血清避免反复冻融,避免在4°C或更高温度储存过久,否则会破坏血清中有效活性成分,影响血清品质。
胎牛血清是否要热灭活:
shouxian胎牛血清不推荐热灭活。
热灭活一般是指在做免疫相关的试验中,通过加热灭活掉血清中的补体,以避免对免疫试验的影响。
在胎牛血清中,由于胎龄原因,尚未形成完整的补体系统,因此,胎牛血清不会真正干预免疫试验。故不需灭活。
并且,热灭活反而可能导致胎牛血清中部分重要的生长因子的活性衰减,进而影响细胞培养效果。
若针对某些特殊试验,对于胎牛血清一定要做热灭活,国际上推荐热灭活的方法:40℃水浴,20min。
胎牛血清融化方法:
血清融化 专业方法:
目的;更好保留血清中活性成分,使细胞培养更稳定。
推荐国际血清厂家 专业融化方法(此方法国际通用,适用于所有种类的血清):
操作 | 温度 | 100ml | 500ml | 1000ml |
第一步 | 室温 | 35 min | 90 min | 100 min |
或15-20℃水浴 | 5 min | 18 min | 20 min | |
第二步 | 20℃水浴 | 15 min | 25 min | 30 min |
第三步 | 37℃水浴 | 20 min | 35 min | 45 min |
注意:
♦在水浴过程中,血清的平面要沉浸在水中。在融化过程中要慢慢摇动瓶身,使血清混匀,但摇动中尽量不要产生泡沫!
胎牛血清 使用说明
血清从-20℃取出后,融化,按推荐体积加入到基础培养基中,混匀,制备成新鲜培养基。(整个操作需在无菌超净台中进行,注意无菌操作。)配置好的培养基推荐在4℃保存,应在1周内用完。
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