硫酸庆大霉素（测试物质：庆大霉素）

硫酸庆大霉素

Ltusuan Qingdameisu Gentamicin Sulfate

  xH₂SO₄

本品为庆大霉素C₁、C_1a、C₂、C₃等组分为主混合物的硫 酸盐。按无水物计算，每1mg的效价不得少于590庆大霉素单位。

【性状】本品为白色或类白色的粉末；无臭；有引湿性。

本品在水中易溶，在乙醇、丙酮或乙mi中不溶。

比旋度   取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每 1ml中约含50mg的溶液，依法测定,比旋度 为+ 107°至十121°。

【鉴别】（1)取本品与庆大霉素标准品，分别加水制成 每1ml中含2.5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板（临用前于105℃活化2小时）上；另取三氯甲烷-甲醇-氨溶液（1 :: 1)混合振摇，放置1小时，分取下层混合液为展开剂，展 开，取出于20〜25°C晾干，置碘蒸气中显色，供试品溶液所 显主斑点数、位置和颜色应与标准品溶液主斑点数、位置和 颜色相同。

（2）在庆大霉素C组分测定项下记录的色谱图中，供试品溶液各主峰保留时间应与标准品溶液各主峰保留时间 一致。

（3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。

（4）本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应。

以上（1)、（2)两项可选做一项。

【检查】酸度  取本品，加水制成每1ml中含40mg的溶液，依法测定，pH值应为4.0〜6.0。

溶液的澄清度与颜色  取本品5份，各0.4g,分别加5ml使溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标 准液比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色2号标准比色液比较，均不得更深。

硫酸盐  取本品约0. 125g，精密称定，加水100ml使溶解，用浓氨溶液调节pH值至11，精密加入氯化钡滴定液 (0.1mol/L)10ml及酞紫指示液5滴，用乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L)滴定，注意保持滴定过程中的pH值为11，滴定至紫色开始消褪，加乙醇50ml,继续滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml氯化钡滴定液 (0. 1mol/L)相当于9. 606mg硫酸盐（S0₄),本品含硫酸盐按无水物计算应为32.0%〜35.0%。

有关物质  精密称取西索米星对照品和小诺霉素标准品各适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含西索米 星和小诺霉素各25μg、50μg和100μg的溶液，作为标准品溶 液（1)、（2)、（3）照庆大霉素C组分项下的色谱条件试验，精密量取标准品溶液（1)、（2)、（3)各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，计算标准品溶液浓度对数值与相应峰面积对数值的线性回归方程，相关系数（r）应不小于0.99；另精密称取本品适量，加流动相溶解并定量稀释制 成每1ml中约含庆大霉素2.5mg的溶液，同法测定，记录色谱图至庆大霉素Q峰保留时间的1.2倍，供试品溶液色谱图中如有西索米星峰、小诺霉素峰，用相应的线性回归方程计算西索米星、小诺霉素的含量。含西索米星不得过2.0%，小诺霉素不得过3.0%。除硫酸峰和亚硫酸峰外 (必要时用硫酸盐和亚硫酸盐定位），其他杂质峰按西索米星线性回归方程计算，单个杂质不得过2.0% ,总杂质不得过4.5%。供试品溶液色谱图中小于0.1%的杂质峰忽略不计。

水分  取本品，照水分测定法测定，含水分不得过15.0%。

炽灼残渣  不得过0.5%。

庆大霉素C组分   照液相色谱法测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂（pH值适应范围0. 8〜8.0)；以0.2mol/L三氟醋酸 溶液-甲醇(96：4)为流动相；流速为每分钟0.6〜0.8ml； 蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：55度，气体流速3l/min，气体压力：3.8bar)测定。取庆大霉素标准品、小诺霉素标准品和西索米星对照品各适量，分别加流动相 溶解并稀释制成每1ml中约含庆大霉素总C组分2. 5mg、小诺霉素0.1mg和西索米星25μg的溶液，分别量取2μl注入液相色谱仪，庆大霉素标准品溶液色谱图应与标准图谱一致， 西索米星峰和庆大霉素G_1a峰之间，庆大霉素C₂峰、小诺霉素峰和庆大霉素C_2a峰之间的分离度均应符合规定；西索米星对 照品溶液色谱图中主成分峰峰高的信噪比应大于20；精密量 取小诺霉素标准品溶液20μl,连续进样5次，峰面积的相对标 准偏差应符合要求。

ELSD9000 蒸发光散射检测器

测定法   精密称取庆大霉素标准品适量，加流动相溶解 并定量稀释制成每1ml中约含庆大霉素总C组分1.0mg、 2.5mg、5.0mg的溶液，作为标准品溶液（1)、（2)、（3)。精密 量取上述三种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，计算标准品溶液各组分浓度对数值与相应峰面积对数值的线性回归方程，相关系数（r）应不小于0.99；另精密称取本品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含庆大霉素2.5mg的溶液，同法测定，用庆大霉素各组分的线性回归方程分别计算供试品中对应组分的量（C_tcx），并按下面公式计算出各组分的含量（%，mg/mg），C₁应为14%〜22%，C_1a应为10%〜23%,C_2a+C₂应为17%〜36%，四个组分总含量不得低于50.0%。

Cx（%) = X 100%

式中C_x为庆大霉素各组分的含量（％，mg/mg);

C_tcx为由回归方程计算出的各组分的含量（mg/ml);

m_t为供试品重量（mg);

V_t为体积(ml)。

根据所得组分的含量，按下面公式计算出庆大霉素各组

分的相对比例。C₁应为25%〜50%,C_1a应为15%〜40%， C_2a + C₂应为20%〜50%。

C’_x%= X 100%

式中C’_x为庆大霉素各组分的相对比例。

细菌内毒素  取本品，依法检查（通则1143)，每1mg庆大霉素中含内毒素的量应小于0.50EU。（供注射用）

【含置测定】精密称取本品适量，加灭菌水定量制成每1ml中约含1000单位的溶液，照抗生素微生物检定法（通则 1201)测定。可信限率不得大于7%。1000庆大霉素单位相 当于1mg庆大霉素。

【类别】氨基糖苷类抗生素。

【贮藏】密封，在干燥处保存。

【制剂】（1)硫酸庆大霉素片（2)硫酸庆大霉素注射液 (3)硫酸庆大霉素缓释片（4)硫酸庆大霉素颗粒（5)硫酸庆大霉素滴眼液

附：

杂质A(西索米星）

C₁₉H₃₇N₅O₇ 447.27

组分C_2b (小诺霉素）

C₂₀H₄₁N₅O₇ 463.30