1.样品加氯仿分层后,移去上层水相（该水相里就是RNA，可照常继续进行RNA的提取）,加0.3ml乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA，涡旋混合，室温放置3分钟，2-8℃不超过2000×g离心5分钟。【注：这一步同时可以除去未*消化的残渣】

2.小心吸出沉淀后的上清，加1.5ml异丙醇沉淀蛋白质。室温放置10分钟，2-8℃12000×g离心10分钟弃上清。

3.加2ml含0.3M盐酸胍的95%乙醇洗涤蛋白质沉淀。室温放置20分钟，2-8℃7500×g离心5分钟，弃上清，重复两次。【注：不太清楚为什么这个时候用这么强烈的变性剂？防止蛋白降解？】

4.用2ml无水乙醇同样方法再洗一次。

5.真空抽干蛋白质沉淀5-10分钟，用1%SDS溶解蛋白质，反复吸打，50℃温浴使其*溶解，不溶物2-8℃10000×g离心10分钟除去。分离得到的蛋白质样品可用于Western Blot或-5至-20℃保存备用。【注：无水乙醇很容易挥发，所以几分钟就能抽干；没有真空抽干机也无所谓，把无水乙醇倒掉，开盖子静置几分钟就行了。这一步干燥千万不能太干了，否则溶解的时候很不爽——很难溶解.我是在50度水浴中过夜，或者每水浴30分钟就放在超声清洗机里清洗10分钟——虽然不是专门用来粉碎细胞的超声，但毕竟是超声波哦，还是蛮有效果的。

 

1.以上各试剂的用量都是以1mLTrizol为准，Trizol体积变化，各试剂用量随之等比例变化。

2.蛋白质沉淀可保存在含0.3M盐酸胍的95%乙醇或无水乙醇中2-8℃一个月以上或-5至-20℃一年以上。

3．这一步可省去：用0.1% SDS在2-8℃透析三次，10000×g离心10分钟取上清即可用于Western Blot。

 

得率低：

A.样品裂解或匀浆处理不*

B．zui后得到的蛋白质沉淀未*溶解

蛋白质降解：组织取出后没有马上处理或冷冻

电泳时条带变形：蛋白质沉淀洗涤不充分