一、禽白血病病毒抗原ELISA批量净化检测试剂盒原理

本试剂盒采用直接竞争ELISA方法批量检测禽白血病病毒抗原。

二、用途

批量检测蛋清、泄殖腔式子、肝脏、病毒培养液等一批中禽白血病病毒，检测结果可用于ALV感染的辅助诊断。

三、禽白血病病毒抗原ELISA批量净化检测试剂盒所需材料

仪器：微孔板酶标仪450 nm/630 nm、振荡器、离心机、、离心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：单道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

试剂：去离子水

五、 试剂盒组成

六、溶液配制

配液1: 洗涤工作液

  用去离子水将20×浓缩洗涤液按1 : 19体积比进行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。

配液2: 1 ×样品稀释液      

  用去离子水将2 ×样品稀释液按1:1体积比进行稀释。配好的1 ×样品稀释液在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。

七、样本前处理                                                  

样本处理前须知：

① 处理完的样品应及时进行下步检测，实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。

② 样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。

样本处理：

①蛋清取全蛋，破碎后取蛋清，,置-20℃以下冻融1次，用微量移液器吸取蛋清直接进行检测。

②泄殖腔拭子用无菌棉签于待检鸡只泄殖腔取样后，放入0.5ml 1×样品稀释液中，置-20℃以下冻融1次，剧烈震荡1分钟，挤出棉签中的液体，弃棉签。以5000r/min离心5分钟，取上清直接进行检测。

③病毒培养液，取病毒培养液以8000r/min离心10分钟，取上清直接进行检测。

④肝脏等组织，取约2g加入0.5ml 1×样品稀释液，研磨破碎，置-20℃以下冻融1次，以5000r/min离心5分钟，取上清直接进行检测。

八、 酶标免疫测定程序

①将所有所需试剂从冷藏环境中取出，待其*回升至室温(20~25℃)后方可使用。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

② 按阳性对照和样品双孔平行的数量使用微孔。

包被板上对照品和待测样品添加如下所示：

(注：P表示阳性对照品;N表示阴性对照品；S1、S2、S3、S4等表示待检样品)

③加入处理好的待检样品，100µL/孔，同时设阴、阳性对照品（各2孔），轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应30min。

④洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加入洗涤工作液300 µL/孔，每次静置20s，甩去孔内液体，重复洗涤3次，最后一次用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

⑤加酶标物：加入酶标物100 µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光孵育30 min。

⑥.甩干孔内液体，重复洗板3次，最后一次用吸水纸拍干。

⑦显色：加入底物液A液50 µL/孔，再加底物液B液50 µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应10min。

⑧测定：加入终止液50µL/孔，用酶标仪立即  测定450nm处的吸光度值。

九、 结果判定

① 试验结果满足有效的前提条件是：阳性对照品孔的平均OD_450nm值>0.20，阴性对照品孔的平均OD_450nm值<0.10。

② S/P=   被检测样品平均OD_450nm/ 阳性对照品孔的平均OD_450nm值

S/P ≥0.2时，判定为阳性样品，数值越大，阳性越强；被检测样品0.1≦ S/P <0.2时，判定为可疑样品，建议一周后重测； 被检测样品OD_450nm值<0.1时为阴性样品。

十、 注意事项

① 本品仅供体外检测使用。

② 样本前处理完毕后以及洗板拍干后应立即进行下一步操作。

③ 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

④不使用过了有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。试剂盒中的各种液体试剂使用前应充分摇匀，平衡至室温。

⑤包被板拆封后未使用，应放回铝箔袋并封口，2～8℃保存，应避免受潮，试剂盒使用完毕后应在2～8℃下保存。

⑥应严格按照试剂盒说明书进行操作，严格遵循各操作步骤规定的时间和温度。

⑦未提及问题请致电本公司技术服务部。

十一、贮藏条件及保存期

   贮藏条件： 2～8℃

保 质 期： 6个月

仅供兽医诊断使用

长期提供原核、真核蛋白表达构建服务

长期 提供抗原偶联、 HRP、生物素、糖基化、亲和素、FITC等偶联标记多肽、抗体、抗原、蛋白等服务