犬细粒棘球绦虫抗原ELISA试剂盒使用说明书

【产品名称】

通用名称：犬细粒棘球绦虫抗原ELISA检测试剂盒

英文名称：Hydatid（ Hyd） coproantigens Test Kit for Canine.

【用途】 本试剂盒采用夹心ELISA方法定性检测犬粪细粒棘球绦虫抗原。

【规格】 96T/盒

【储藏与有效期】 2～8℃保存，有效期12个月。

【试剂盒组成】

【犬细粒棘球绦虫抗原ELISA试剂盒使用说明书溶液配制】

1. 洗涤液配制：用蒸馏水或去离子水将洗涤液 10×按 1:9 稀释，充分混匀即为工作浓度洗涤液。

2. 样品稀释液配制：用蒸馏水或去离子水将样品稀释液 2×按1:1 稀释（如取100mL 浓缩样品稀释液加 100mL 蒸馏水或去离子水），充分混匀即为工作浓度样品稀释液。

【实验准备】所有试剂使用前恢复至室温(25℃左右)，以免温度过低影响抗原抗体反应。

【样品要求】
1. 本试剂适用于检测犬粪样品；
2. 应采集新鲜的犬粪样品进行测试。若不能及时检测，应将粪样低温冻存，防止反复冻融。如犬粪难以溶解，应适当捣碎处理。

【操作步骤】

1. 样品处理：犬粪样品需要预先低温（ -70℃以下） 冷冻 7 天以上，以灭活虫卵。称取 1克犬粪,加入1mL样品稀释液，充分搅拌混匀，静置10分钟，再3000rpm离心10分钟，取上清液待检。
2. 加样反应：样品孔，每孔仅加入100μL待检样品；阴性对照2孔，每孔仅加入100μL阴性对照品；阳性对照 2 孔，每孔仅加入 100μL 阳性对照品。盖好封板膜，37℃避光反应30分钟。

3. 洗板：甩去孔内液体，每孔注满工作浓度洗涤液洗板3 次，每次均需静置1分钟；最后一次甩净，拍干。

4. 加酶反应：每孔加酶结合物100μL，盖好封板膜，37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体，如上洗板，拍干。

5. 显色反应：按所需用量，临用前取等体积底物液和显色液充分混匀后每孔加100μL，盖好封板膜，37℃避光反应10分钟。

6. 终止反应：加终止液50μL，用酶标仪于450nm波长（630nm作为参比波长）读取OD值。

【结果判定】

1. Cut-off 值（COV）=阴性对照平均OD值×2.1（阴性对照孔OD 值＜0.15 时按0.15计）。
2. 有效性判定：
阴性对照孔 OD 值≤0.30（ 若大于 0.30 则实验无效）；
阳性对照孔 OD 值≥0.50（ 若小于 0.50 则实验无效）。

【判定标准】

样品 OD 值≥COV， 判为犬细粒棘球绦虫抗原阳性；
样品 OD 值＜COV， 判为犬细粒棘球绦虫抗原阴性。

【检验方法的局限性】本试剂盒仅供筛查，不作为确诊依据。

【注意事项】

1. 所有试剂使用前恢复至室温(25℃左右)，以免温度过低影响抗原抗体反应。

2. 实验前应用温度计检查温箱温度，温度过高或过低影响OD值高低。

3. 包被板反应时严禁堆叠放置，应该平铺且板间有空隙，不要离温箱壁太近。

4. 实验所用移液器及设备应定期校准。

5. 底物液和终止液对皮肤有刺激性，请带手套注意个人防护。

长期提供原核、真核蛋白表达构建服务

长期 提供抗原偶联、 HRP、生物素、糖基化、亲和素、FITC等偶联标记多肽、抗体、抗原、蛋白等服务