5XFAD
时间：2017-02-13 阅读：6576
5XFAD小鼠基因检测报告-2016.9.7
动物品系： 5XFAD 小鼠 操作日期：2016.9.5-2016.9.7
1.主要试剂
试剂名称 | 生产厂家 | 备注 |
上游引物oIMR 3610 | Invitrogen | √ |
下游引物oIMR 3611 | Invitrogen | √ |
上游引物oIMR1644 | Invitrogen | √ |
下游引物oIMR 1645 | Invitrogen | √ |
阳性内标oIMR7338 | Invitrogen | √ |
阳性内标oIMR7339 | Invitrogen | √ |
TE缓冲液 | Invitrogen | √ |
琼脂糖 | Invitrogen | √ |
Sybr Safe 染液 | Invitrogen | √ |
TAE缓冲液 | 自制 | √ |
EmeraldAmp PCR Master Mix | TAKARA | √ |
RNase-free水 | GIBCO | √ |
注：实验中用到的试剂在备注项打“√”，没有用到的试剂打“—”，与列表不一致的试剂在备注中说明。
2.主要仪器：
仪器名称 | 生产厂家 | 仪器型号 | 仪器编号 | 备注 |
MINI离心机 | FORCE | SBC140-2 | SB0363 | √ |
漩涡混合仪 | Scientific Industries | G560E | SB0484 | √ |
电子天平 | AL104-IC | 梅特勒托利多 | SB0006 | √ |
PCR仪 | BIO-RAD | Thermal Cycler | SB0407 | √ |
移液器 | Thermo/ Eppendorf/Brand | P10/P100/ P200/P1000 | SB0108/SB0230 SB0608/SB0089 | √ |
注：实验中用到的仪器在备注项打“√”，没有用到打“—”，与列表不一致的在备注中说明。
3.PCR操作步骤
试剂 | 体积（μl） |
模板 | 1 |
oIMR3610 | 0.4 |
oIMR3611 | 0.4 |
oIMR1644 | 0.4 |
oIMR1645 | 0.4 |
oIMR7338 | 0.4 |
oIMR7339 | 0.4 |
Master mix (2×) | 10 |
RNase-free水 | 6.6 |
终体积 | 20 |
4. PCR反应条件
94 ℃ 3 min；
94 ℃ 30 sec， 54 ℃ 60 sec，72 ℃ 60 sec 35×；
72 ℃ 5 min；
5. 1%琼脂糖凝胶电泳体系
称取 1.6 （1.6g）琼脂糖加入 100 （100ml）TAE缓冲液中混匀，微波炉加热两次沸腾后加7μl染液，混匀，倒入板中凝固。凝固后每孔加入15μl样本，每行*孔加入5μl Marker。进行凝胶电泳。
6. 拍图
完成的凝胶电泳经过凝胶成像系统拍图得出结果
7. 结果判定标准
引物名称 | 序列（5’→3’） | PCR产物大小 |
上游引物oIMR 3610 | AGGACTGACCACTCGACCAG | 377bp |
下游引物oIMR 3611 | CGGGGGTCTAGTTCTGCAT | |
上游引物oIMR1644 | AATAGAGAACGGCAGGAGCA | 608bp |
下游引物oIMR 1645 | GCCATGAGGGCACTAATCAT | |
阳性内标oIMR7338 | CTAGGCCACAGAATTGAAAGATCT | 324bp |
阳性内标oIMR7339 | GTAGGTGGAAATTCTAGCATCATCC |
8. 结果判定
根据成像结果及判定标准，阳性动物编号如下：共计16只
8566、 8582、8584、8573、8586、8588、8577、8590、
8591、 8592、8543、8593、8546、8547、8595、8596