通用型 DNA 损伤彗星银染检测试剂盒产品说明书
时间:2021-09-08 阅读:960
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上海哈灵生物科技有限公司 -
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通用型 DNA 损伤彗星银染检测试剂是一种旨在采用组织细胞碱性凝胶电泳,在电场环境下,损伤变性的 DNA 片段迁移形成特定的形态,即 DNA 移动尾巴,来进行体外评价和半定量分析 DNA 损伤程度的 而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于新鲜动物细胞、组织、血液、骨髓 等样品的 DNA 损伤研究,包括 DNA 链断裂、氧化性碱基损伤、DNA 剪切损伤、DNA 交联、DNA 修复等, 应用于环境和药物毒理学、放射学、氧化应急反应等研究。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,操作简 便,重复一致。
技术背景
彗星检测技术(Comet assay),又称为单细胞凝胶电泳检测技术(single cell gel electrophoresis assay;SCGE) 或微凝胶电泳检测技术(microgel electrophoresis assay),是基于变性切离的DNA片段,在电场的影响下, 从细胞中移出的原理,而完整的超螺旋DNA仍然保持在细胞核内。通过凝胶电泳,呈现出分子迁移图形, 形成彗星拖尾(comet tail)现象,即完整DNA的细胞染色体为“头”,而松散和断裂的DNA为“尾”,以此评 价DNA损伤程度。这是分析单一细胞DNA链断裂的敏感方法之一。其技术方法的基本步骤是:第一,细胞 固定包埋在凝胶里;第二,细胞裂解处理;第三,DNA变性处理;第四,电泳迁移;第五,染色和图像分 析。由此观察DNA迁移形态,进行体外检测,成为细胞DNA损伤研究的基本手段。其中电泳条件将决定检 测的敏感程度。碱性电泳(alkaline electrophoresis)为常规电泳检测,可以检测单链DNA断裂、双链DNA 断裂、大部分无嘌呤核酸位点(apurinic site)和无嘧啶核酸位点(apyrimidic site)、碱不稳定DNA结合物 (alkali-labile DNA adduct)等DNA损伤。
用户自备 无离子水:用于稀释电泳缓冲液 磨砂载玻片和盖玻片:用于放置样品进行微凝胶电泳的器材 电泳槽:用于微凝胶电泳的装置 恒温培养箱或恒温水槽:用于孵育反应 1.5 毫升离心管:用于样品操作的容器 90 mm 培养皿:用于样品处理、染色等的容器 光学显微镜:用于观察细胞彗星现象
注意事项 1. 本产品为 20 次操作 2. 操作时,须戴手套 3. 整个操作,建议在暗光下进行 4. 建议使用新鲜培养的动物细胞、组织、血液等;细胞量为 105细胞/毫升 5. 可以使用 100 微摩尔过氧化氢或 25 微摩尔高锰酸钾冰上孵育 10 分钟预处理样品作为阳性对照 6. 电泳液(Reagent E): 10 倍浓度为 3 摩尔 NaOH,10 毫摩尔 EDTA,pH 13.5 7. 净化液(Reagent F): 70%ETHANOL 8. 操作时小心轻柔,避免胶体脱位 9. 电泳温度过高,会造成胶体脱位5 10.电泳时,电压 25 伏为佳,建议控制电泳液量达到要求 11.细胞 DNA 损伤彗星图像如下(400 倍)