兼容常规与链特异性mRNA文库构建
时间:2019-10-30 阅读:1119
Hieff NGS® MaxUp II Dual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina
——兼容常规与链特异性mRNA文库构建
背景简介
RNA被认为是生物信息传递的“桥梁”。而转录组测序可利用NGS技术对组织或者细胞中的RNA反转录之后的cDNA文库测序,通过分析可计算不同RNA的表达量、发现新的转录本、进行转录本定位、分析可变剪切、检测基因融合等,提供全面的转录组信息。
图 遗传学中心法则
目前主流的mRNA建库主要流程是mRNA纯化,mRNA逆转录,双链cDNA合成,末端修复,A尾添加,接头连接,纯化/分选,文库扩增,时间上需要1.5 d甚至更久。
翊圣生物结合自身多年的分子酶创新研发经验,推出升级版快速mRNA建库试剂盒,可在短的时间进行建库。助力获得优异的转录组测序数据。
亮点一览
1、建库快速:完整建库比主流方法缩减1.5-2 h,1 d内获得高质量文库。
图 升级版建库试剂盒建库流程
2、兼容常规与链特异性文库构建
本产品搭配两种二链合成buffer,即含dNTP(常规建库)与dUTP(链特异性建库),可兼容两种模式的mRNA文库构建。一个盒子两种用处,不用再额外备货。
3、逆转录酶,更适合复杂模板
RNaseH能特异的降解RNA-DNA杂交分子中RNA的特性,将RNA降解成小片段,影响反转录效率。YEASEN提供的第四代Hifair逆转录酶,去除RNase H活性,同时温度的耐受性高达65℃,有利于复杂RNA模板二级结构的打开,更利于逆转录的进行。
硬核支撑
以1 μg的标准品RNA(Agilent#740000)为起始,分别构建链特异性文库和非链特异性文库,质控后的文库用illumina Hiseq X-10 PE150测序。
a. 优异的测序质量
b. 表达重复性高
c. 优异的文库均一性
d. rRNA残留更低,有用数据更多
e. 链特异性建库:98.5%的Reads比对到正义链上
客户案例
单位:广州某生物公司J*
样本:草莓,油菜,核盘菌
结论:高质量文库,优异的测序数据
a. 文库报告
b. 测序质量
c. 数据比对
d. 数据分布
e. 基因覆盖度分析
单位:上海某生物公司O*
样本:人,大鼠,西瓜
结论:高质量文库,优异的测序数据
a. 建库报告
b. 测序质量
c. 数据比对
d. 数据分布
e. 基因覆盖度分析
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