多样本直接PCR系列专题
时间：2017-08-02 阅读：1833
多样本直接PCR系列专题
More Genotyping, Less Time and Fewer Reagents
PCR-based Genotyping等实验，常需纯化样本基因组。当待测样本较多时，纯化基因组的过程费时、操作重复，并且实验成本高。翊圣生物通过改造Taq DNA聚合酶，优化PCR反应体系开发出无需基因组纯化的Direct PCR Kit系列产品。
Clever PCR：Direct PCR
翊圣Direct PCR Kit是直接从样本开始，以未经基因组纯化的微量原始样本（图1-A）或其裂解产物（图1-B）作为模板，进行PCR-based Genotyping（见图1）。与常规PCR-based Genotyping相比，Direct PCR Kit样本用量少，操作简单，实验成本低，可高通量化样本检测。
图1 Direct PCR技术 A. 直接法：取少量样本直接加入到PCR Master Mix中，进行PCR鉴定。B. 裂解法：样本取样后，加入裂解液中，裂解释放基因组，取少量裂解上清液加入到PCR Master Mix中，进行PCR鉴定。
技术优势
★直接：无需进行费时而昂贵的DNA纯化
★快速：10min完成模板制备，zui少50min完成PCR反应
★简便：样品无需剪碎或研磨即可完成裂解
PCR Mix为预混液形式，减少加样步骤
★节省：材料用量少
★高通量：可在96孔板中完成裂解反应
翊圣生物Direct PCR Kit
产品参数 | Animal Tissue Direct PCR Kit | Mouse Tissue Direct PCR Kit | Plant Tissue Direct PCR kit | Animal Blood Dicrect PCR Kit |
适用生物 | 小鼠、兔子、鸟类、淡水鱼、果蝇、线虫、狗 | 小鼠、大鼠 | 水稻、玉米、烟草、油菜、小麦、大豆等 | 人血、鼠血、鸡血、鸟血、牛血、狗血 |
适用组织/材料类型 | 脑、心脏、肝脏、胰脏、肾脏、脾脏、睾丸、肌肉、羽毛末端 | 鼠尾、鼠耳、脚趾（带肌肉）和其他脏器 | 嫩叶、老叶、幼苗、嫩茎 | EDTA、Heparin抗凝全血、血液的采集卡、冷冻血和抗凝血等 |
样品使用量 | 5-10mg | 5-10mg | 3-5mg（5-7mm），1-2mg（2-3mm） | 人血2-45%；鼠血2-20%；采集卡1-4mm |
基因组释放时间 | 10-30min | 10-30min | 10min或无需专门裂解过程 | 无需专门裂解过程 |
PCR产物zui适长度 | ＜1kb | |||
PCR产物是否加A | 裂解反应体系加A效率不定 | |||
50µL体系，裂解产物使用量 | 0.5-5µL | 0.5-5µL | 5-10µL | 人血2-45%；鼠血2-20%；采集卡1-4mm |
应用 | 转基因鉴定、基因分型等 | 转基因鉴定、基因分型等 | 转基因鉴定、基因分型等 | 基因型，病原微生物鉴定 |
Direct PCR Kit实验过程
本系列产品运用*的蛋白酶裂解体系，裂解样品，裂解液可直接作为模板，搭配试剂盒中的PCR Master Mix进行基因扩增。
图2 动物、小鼠组织直接PCR实验过程
图3 动物全血直接PCR实验过程
图4 植物组织直接PCR实验过程
产品优势
Ø 改造的Taq DNA Polymerase是Direct PCR的保证：*的抑制物耐受性
对于非纯化样本作为模板时，会引入很多对PCR反应有抑制的成分。以普通的PCR反应体系和Taq DNA聚合酶较难得到理想的结果，甚至无法进行PCR扩增。本系列试剂盒中PCR Mix为配方优化预混液，采用改造的Taq DNA Polymerase，增加与模板DNA结合能力，对于常见PCR抑制剂具有更高的耐受性，因此具有更广泛的模板适应性。
图5 直接PCR Kit中的PCR Mix具有更高的杂质耐受度。相同模板量，用不同的PCR Mix进行PCR，同时在体系中加入不同浓度的各种PCR反应抑制物。比较不同条件下的PCR产物量。
翊圣生物针对不同样本，开发出一系列产品。
一、多动物通用型：Animal Tissue Direct PCR Kit
Ø zui快速：操作时间短
图6 翊圣动物组织直接PCR试剂盒更加节省时间。
Ø 实验例：基因敲除小鼠基因型鉴定
图7 动物组织直接PCR试剂盒检测基因敲除动物组织直扩结果。M：100bp DNA ladder。1-8：以裂解产物为模板。+：以50ng纯化基因组DNA为模板。﹣：以去离子水为模板。循环数：35个循环。单条带（580bp）：敲除动物纯合子基因组。单条带（180bp）：野生型基因组。两条带（580bp/180bp）：敲除动物杂合子基因组。
二、啮齿类型：Mouse Tissue Direct PCR Kit
Ø 更快速：基因释放充分
图8 小鼠组织直接PCR试剂盒不同裂解时间直扩结果。M：100bp DNA ladder。+：以50 ng纯化基因组DNA为模板。循环数：35个循环。
Ø 更*：基因释放充分
1、优于常规碱裂解方法
图9 鼠尾经不同裂解方式处理后，直扩结果。检测基因：SOX21。M：100 bp DNA ladder。1-2：以常规碱裂解方式处理裂解产物为模板。3-4：以小鼠组织直接PCR试剂盒裂解产物为模板。+：以50 ng纯化基因组DNA为模板。﹣：以去离子水为模板。循环数：35个循环。
2、媲美同类产品
图10 鼠尾经不同品牌同类产品裂解处理后，直扩结果。检测基因：SOX21。M ：100 bp DNA ladder。+ ：以50 ng纯化基因组DNA为模板。循环数：35个循环。
三、多动物通用型：Animal Blood Direct PCR Kit
Ø zui大模板耐受度：高达45%
图11 不同体积的EDTA抗凝人血加入量，动物血液直接PCR试剂盒直扩结果。检测基因：SOX2。M：DNA Marker I。循环数：30个循环。
四、植物类型：Plant Tissue Direct PCR Kit
Ø 多类型植物样本验证
图12 不同类型植物叶片直扩结果。M：100 bp DNA ladder。C：相应植物纯化基因组DNA为模板。1-2：叶片组织裂解产物为模板。循环数：30个循环。
客户实验
1、转基因小鼠基因型鉴定
图13青岛大学用户使用鼠尾直接PCR试剂盒扩增某基因结果。M：DNA marker II。1-12：转基因小鼠鼠尾裂解液。13：阳性质粒对照。﹣：以去离子水为模板。循环数：30个循环。
2、水稻基因直扩
图14 华中农业大学用户使用植物直接PCR试剂盒扩增水稻相关基因
订购信息
产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
10180ES50 | Animal Tissue Direct PCR Kit 动物组织直接PCR试剂盒 | 50 T | 326.00 |
10180ES70 | 200 T | 1236.00 | |
10181ES50 | Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠组织直接PCR试剂盒 | 50 T | 326.00 |
10181ES70 | 200 T | 1236.00 | |
10182ES50 | Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR试剂盒 | 50 T | 326.00 |
10182ES70 | 200 T | 1236.00 | |
10183ES50 | Plant Tissue PCR Kit 植物组织直接PCR试剂盒 | 50 T | 326.00 |
10183ES70 | 200 T | 1236.00 |