如何8小时内在单块孔板中筛选上百万个B细胞？
时间：2024-03-21 阅读：137
抗体是理想的治疗性生物大分子，不但能与各种靶点结合，且具有高亲和力和特异性。随着杂交瘤和噬菌体展示技术的创新，药物研发人员能够利用抗体的天然多样性，广泛使用单克隆抗体（mAbs）治疗癌症、慢性炎症和传染病。
作为抗体开发上游的关键技术环节，单B 细胞筛选技术已经有了显著发展，并成为获取抗原特异性mAb 序列的主要来源。然而，这一技术仍然面临诸多挑战，如：开发效率低、成本高昂等问题。
只需一台Incucyte®实时活细胞分析系统，结合CellTraxx 软件便可自动对细胞的运动和形态进行高通量、实时的无标记追踪，轻松为每一个细胞都装上“GPS”，让您的研究跳脱传统束缚，迈入高效率的新时代。
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高效可靠的新型单细胞分离技术
基于纳米孔阵列和图像验证的高通量克隆筛选（HT-NIC）技术基于CellCelector纳米孔板，每个大孔底部都有多达数十万个纳米孔，能够有效地对成千上万个单细胞进行分离，同时确保细胞被相同的培养基覆盖，因此可以共享生长因子，在共培养环境下更容易生长至克隆。
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全面加速的B细胞筛选流程
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灵活经济的B细胞筛选方案
CellCelector支持明场、相差以及蓝色、绿色、红色、远红外和近红外荧光通道成像以进行分泌物多重分析。对纳米孔板中的单个细胞进行单细胞分泌分析，能够快速识别理想的分泌细胞。CellCelector B细胞工作流程支持多种细胞分析策略，包括使用抗原包被孔板、加入微球或抗原表达报告细胞的分析策略。
图1. CellCelector B细胞工作流程和基于纳米孔的分泌测定示意图
CellCelector B细胞筛选可使用H100型（六边形）纳米孔板，每个大孔包含60,000个纳米孔，且具有无细胞毒性和低黏附性的特点，防止细胞附着，不受细胞的粘附性或悬浮条件优化的影响，可有效分离单个B细胞并进行分泌物检测。
图2. H100六边形纳米孔板
图3. 孔板内包被抗原的B 细胞分泌分析方案
图4. 微球和报告细胞的单B 细胞筛选方案
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可视化筛选和挑取过程
使用CellCelector 分离和表征原代B细胞。使用明场和荧光扫描52,000个纳米孔，鉴定含有分泌抗体（AF647+）的B细胞且对EGFR结合呈阳性（AF488+）的B细胞纳米孔。（A）荧光特异性647nm发射的图像（红色）；含有抗体分泌细胞的两个邻近孔可以观察到三个红色荧光孔，表示它们分泌了目标抗体（ASC）。（B）荧光特异性488nm发射的图像（绿色）；一个含有EGFR特异性ASC的邻近孔两个绿色的孔代表其分泌物能够和EGFR结合。（C）来自647和488nm通道的图像叠加和（D）用于挑取EGFR+ASC的明场图像。从纳米孔挑取EGFR+ASC之前和之后的明场图像（E）和（F）挑取前后的明场图像显示纳米孔内所有的内容物均已挑取。
图5. 细胞分泌分析示例[1]
总结
传统B细胞筛选 | CellCelector B细胞筛选 |
费时费力、效率低下且成本高昂 | 使用自动化分析和分离流程，仅需一块纳米孔板即可实现上万个单B细胞筛选，高效且节约 |
需要引入多种分析工具筛选单B细胞，并评估B细胞性能和产量 | 基于HT-NIC方法，在单次分析流程中即可对B细胞分泌物特异性及产量进行评估，并有效回收分离 |
操作复杂，需要专业操作人员 | 高度集成的自动化流程减少人力投入，操作简便
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提高临床和生物治疗研究及
抗体开发中 B 细胞工作流程的效率
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-参考文献-
[1] Matacho et al. (2022). Antibody Therapeutics, Volume 5, Issue 1, January 2022, Pages 11–17