Calcein AM/PI Double Stain Kit 活细胞/死细胞双染试剂盒

产品信息

活/死细胞双染试剂盒（荧光探针细胞染色）活/死细胞双染试剂盒（荧光探针细胞染色）

 试剂盒组分

编号                  组分                 保存方法          产品编号/规格
                                                         FS1161-500T   FS1161-1000T
FS1161-A Calcein AM Solution (4mM)       -20ºC避光              50μl 50μl×2
FS1161-B PI Solution（1.5 mM）             -20ºC避光           200μl 200μl×2
FS1161-C 10×Assay Buffer                      -20ºC~4℃            50ml 100ml
产品描述
本钙黄绿素AM/碘化丙啶双染试剂盒(Calcein AM/PI Double Stain Kit)，包含钙黄绿素AM和碘化丙啶两种荧光染料，用于对活细胞和死细胞的同时染色，即是常称的活细胞/死细胞双染试剂盒（Live/Dead Cell Double Staining Kit）。
试剂盒工作原理在于：Calcein AM（钙黄绿素乙酰甲酯），CAS 48504-34-1，一种具高度亲脂性和细胞膜渗透性的活细胞荧光染料。本身不具荧光，一旦进入细胞后，被细胞内酯酶水解生成钙黄绿素（calcein），产生亮绿色荧光（Ex/Em= 490nm/515nm）。因此，Calcein AM仅对活细胞进行染色。另一方面，碘化丙啶（PI），一种细胞核染料，不能穿透完整的活细胞膜。只能穿透死细胞的不规则区域进入细胞核，然后嵌入DNA双螺旋区域，产生红色荧光（Ex/Em= 535nm/617nm）。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545 nm激发，仅可观察到死细胞。结合这些特点，Calcein, AM和PI经常被结合用作活细胞和死细胞的双重染色。
注意事项
1）由于Calcein-AM对湿度非常敏感，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。
2）碘化丙啶（PI）有一定的致癌性，操作时一定要注意防护。若接触到皮肤，需要立即用自来水清洗。
3）为了您的an全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、试剂准备
1.1 1×反应缓冲液（Assay Buffer）的配制
从低温冰箱内取出10×Assay Buffer，根据单次用量无菌条件取出适量，用去离子水（dH2O）做10倍稀释以得到1×Assay Buffer。
1.2    1×染色工作液（Stain Buffer）的配制
1）   先将低温保存的Calcein AM溶液 (4 mM)和PI溶液（1.5 mM）室温回温至少20min，使其充分融化。【注意：*次使用时建议对储存液根据单次用量分装，特别是Calcein AM，以减少反复冻融次数。】
二、染色步骤
常见问题
1、该试剂盒适用任何细胞类型？
基本上适用于任何含酯酶活性的动物细胞。植物和xi菌细胞因含有细胞壁，Calcein-AM不能进入因此无法染色。有可能对原生质体进行染色。
2、用相同浓度有可能对所有哺乳动物细胞进行染色？
对所有细胞都用相同的浓度是很不合理的。Calcein-AM和PI的zui加工作浓度根据细胞类型差异很大。有必要根据具体细胞来确定zui价染料浓度。参考说明书染料工作浓度优化方法。
3、Calcein-AM对细胞有毒？
与其他相似的活细胞染料比较，Calcein-AM基本无毒（毒性zui小）。见文献EL.S.D.Clerck,et.al., J.Immunol.Methods, 172,115-124(1994)
4、 试剂盒如何保存？
密封-20℃保存。Calcein-AM遇潮会水解，因此直至管子温度达到室温后才能开盖。使用后拧紧盖子。用缓冲液或者培养基稀释后的染色工作液需即刻使用。不能保存后使用。