X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷

产品信息

产品描述
  X-Gal,英文全名5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-galactopyranoside ,中文全名5溴-4-氣-3-吲哚B-D-吡喃半乳糖苷, CAS NO: 7240-90-6,郢半乳糖苷酶(B-gal，beta-gal )的组织化学显色底物，能被水解生成半孚糖和5溴4-氣-3羟基吲哚。5-溴 -4-氣3-羟基吲哚是一种可溶、无色的吲哚水解产物，随后通过二聚合和氧化反应,被转化为- -不可溶蓝色产物-5,5'二溴-4,4' -二氣靛蓝。
  X-Ga|是分子生物克隆实验中用来检测B-gal活性的一种主流试剂，可用来检测外源DNA是否插入质粒DNA的lacZ区。当外源DNA成功插入lacZ区,会破坏B-gal的a-互补,导致其活性丧失,则无法水解X-Gal使得菌落呈白色。而保留-gal正常活性的**能产生蓝色菌落。许多其它应用也常将X-Gal用作底物来检测-gal活性，这些应用包括: 1) B-gal-抗体连接的免疫分析和免疫组化;2)基于-gal诱导的大肠杆菌噬菌体检测; 3)肿瘤进展微转移形成的检测。
  X-Ga|常常与IPTG(货号: FS0373 )联合使用进行蓝白斑克隆筛选。本品达分子生物学级别。

产品使用方法

1. X-Gal储存液配制：
称取0.2g X-Ga|装入15m|离心管,加入10ml DMF ,鹿荡使其充分溶解。按照1m/管分装,并用铝箔纸包裹离心管使其避光，置于-20C冻存，正常情况下6-12个月稳定。
2. IPTG储存液配制：
 称取0.238gIPTG溶于10ml去离子水中,充分溶解混匀后,经0.22um滤膜过滤**,即得到100mM ( 100x )的储存液。按照1m/管分装,置置于-20*C冻存，高达一年稳定。
3.蓝白斑筛选方法
X-Gal常与IPTG联合使用进行蓝白斑克隆筛选。
方法1: X-Gal. IPTG加入固体培养基(推荐)
1)高压**已加琼脂的培养基，并冷却到50C左右;
2)每m|培养基内加入10ul 20mg/ml X-gal溶液、10ul 100mM IPTG (使其终浓度达到1mM) ;3)加入适量筛选***如氨苄青霉素，卡那霉素，羧苄青霉素等;4)混匀后倒板，置于无菌超净台内使培养基凝固(通常需要30min)。[注意] : 蓝白斑筛选用的平板请置于4C避光保存, 1周稳定。
5)将转化的感受态细胞涂布到上述平台,于379C倒置培养过夜,观察蓝白斑情况。
方法2: X-Gal. IPTG直接涂布平板表面1)于无菌超净台内干燥倒好的平板;
2)加120ul 20mg/ml X-gal溶液、40pl 100mM IPTG到平板表面,并涂布均匀夏盖整个平板;3)于无菌超净台内干燥上述平板，至少需要30min;
4)将转化的感受态细胞涂布到上述平台，于379C倒置培养过夜,观察蓝白斑情况。

1. X-Gal储存液配制：
称取0.2g X-Ga|装入15m|离心管,加入10ml DMF ,鹿荡使其充分溶解。按照1m/管分装,并用铝箔纸包裹离心管使其避光，置于-20C冻存，正常情况下6-12个月稳定。
2. IPTG储存液配制：
 称取0.238gIPTG溶于10ml去离子水中,充分溶解混匀后,经0.22um滤膜过滤**,即得到100mM ( 100x )的储存液。按照1m/管分装,置置于-20*C冻存，高达一年稳定。
3.蓝白斑筛选方法
X-Gal常与IPTG联合使用进行蓝白斑克隆筛选。
方法1: X-Gal. IPTG加入固体培养基(推荐)
1)高压**已加琼脂的培养基，并冷却到50C左右;
2)每m|培养基内加入10ul 20mg/ml X-gal溶液、10ul 100mM IPTG (使其终浓度达到1mM) ;3)加入适量筛选***如氨苄青霉素，卡那霉素，羧苄青霉素等;4)混匀后倒板，置于无菌超净台内使培养基凝固(通常需要30min)。[注意] : 蓝白斑筛选用的平板请置于4C避光保存, 1周稳定。
5)将转化的感受态细胞涂布到上述平台,于379C倒置培养过夜,观察蓝白斑情况。
方法2: X-Gal. IPTG直接涂布平板表面1)于无菌超净台内干燥倒好的平板;
2)加120ul 20mg/ml X-gal溶液、40pl 100mM IPTG到平板表面,并涂布均匀夏盖整个平板;3)于无菌超净台内干燥上述平板，至少需要30min;
4)将转化的感受态细胞涂布到上述平台，于379C倒置培养过夜,观察蓝白斑情况。

产品属性

CAS号： 7240-90-6

别名： 5-溴-4氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷；5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷

英文名称： X-gal；BCIG；5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactoside

分子式： C14H15BrClNO6

分子量： 408.63

纯度：≥99.0%

Specific Rotation (0.1%, 50% DMF)：-60～-63°

性状：白色或淡黄色粉末 

储存条件：-20°C

注意事项
1)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)用途：本品仅供科研，不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的显色底物，在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物。常用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选。

3)X-gal优选溶剂为DMF。若使用DMSO作为溶剂，选择相对新鲜且高质量的DMSO极为重要,持续性的研究发现由于使用旧或低质量DMSO造成很多问题。建议大部分实验都用DMF作为溶剂

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