产品名称：MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

内容：    MTT染色液  5ml           Formazan溶解液     55ml

保存条件：MTT染色液需-20℃避光保存；Formazan溶解液可以室温保存。

产品简介：

    1.MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的实验方法。由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此常常用来检测细胞的增殖情况。MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。在特定溶剂存在的情况下，可以被*溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

        2.本试剂盒采用了*的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。

        3.本试剂盒背景低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便提高了可靠性。

        4.本产品为500 次（5个96孔细胞培养板）操作。

使用说明：

1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul，铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。

2.5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。加入浓度梯度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，每孔0-10ul，设3-5个复孔.建议设5个。

3.5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

4.每孔加入10微升MTT染色液，继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

5.每孔加入100微升Formanzan溶解液，置摇床上低速振荡10-30min，使结晶物充分溶解（如果仍有部分formazan未溶解，建议用移液器反复轻轻吹打2-3次避免产生气泡或孵育溶解）。在酶联免疫检测仪570nm测定吸光度。如无570nm滤光片，可以使用560-600nm的滤光片。

6.同时设置调零孔（培养基、MTT染色液、Formanzan溶解液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT染色液、Formanzan溶解液）。

注意事项：

1.由于使用96孔板进行检测，如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了。

2.MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

3.MTT一般4ºC避光保存两周内有效，保存在-20度长期保存，避免反复冻融，小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解，尤其当MTT变为灰绿色时就不能再用了。

4.Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。

5.孵育时，须避光。

6.MTT有致癌性，用的时候小心，有条件带那种透明的簿膜手套。配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感。