*章 Western Blot 简介

1.1  Western Blot 原理

    与 Southern 或 Northern 杂交方法类似，但 Western Blot 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过 PAGE 分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

1.2  Western Blot 优点

高分辨率的电泳技术

特异敏感的抗原-抗体反应

1-5 ng 中等大小的靶蛋白

Western Blot 结合了凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定的特异敏感等多种优点，可检测到低至 1～

5 ng（zui低可到 10～100 pg）中等大小的靶蛋白。

1.3  Western Blot 应用

目的蛋白的表达特性分析

目的蛋白与其它蛋白的互作

目的蛋白的组织定位

目的蛋白的表达量分析

1.4  Western Blot 成功要素