ACQUITY BEH色谱柱堵塞了怎么办？教你如何让色谱柱重获新生
时间：2022-11-24 阅读：2344
ACQUITY BEH色谱柱清洗、再生和存放
a. 清洗与再生
如果发生峰形改变、谱峰分叉、出现肩峰、保留时间改变、分离度变化或柱压升高，说明色谱柱可能已被污染。通常情况下，用纯有机溶剂进行冲洗（小心避免缓冲盐出现析出）就足以去除污染物。如果冲洗不能解决问题，可采用以下清洗和再生步骤。
根据样品和/或您认为污染色谱柱的物质的性质，选择与之匹配的常规清洗方法（见表3）。
表3.ACQUITY BEH色谱柱的推荐pH和温度限值
| 色谱柱 | 粒径 | 孔径 | 表面积 | pH限值 | 温度限值 | 配基密度 | 碳载量% | |
| 低pH | 高pH | |||||||
| BEH C18 | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 1-12 | 80℃ | 60℃ | 3.1μmol/m2 | 17.7 |
| BEH C8 | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 1-12 | 60℃ | 60℃ | 3.1μmol/m2 | 12.8 |
| BEH苯基柱 | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 1-12 | 80℃ | 60℃ | 3.0μmol/m2 | 14.5 |
| BEH Shield RP18 | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 2-11 | 50℃ | 45℃ | 3.2μmol/m2 | 16.6 |
| BEH HILIC | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 1-9 | 60℃ | 45℃ | — | — |
| BEH Amide | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 2-11 | 90℃ | 90℃ | 7.5μmol/m2 | 12 |
请使用20倍柱体积的溶剂冲洗色谱柱。升高柱温可提高清洗效率。如果清洗和再生之后色谱柱性能仍然很差，请致电我们获得更多支持。
用50:50乙腈/水冲洗BEH HILIC色谱柱，去除极性污染物。如果此冲洗操作不能解决问题，可用5:95乙腈:水冲洗色谱柱。
要清洗BEH Amide色谱柱中的极性污染物，请运行10 min内水从0增加到100%的梯度。请注意，随着水的比例上升，柱压也将迅速增大。在含水量大于60%的条件下运行时，请降低流速。必要时请重复该操作。
表4.反相色谱柱清洗顺序
| 极性样品 | 非极性样品* | 蛋白质样品 |
| 1.水 | 1.异丙醇(或适当比例的异丙醇/水混合溶液** ) | 选项1：重复进几针二甲基亚砜(DM SO) |
| 2.甲醇 | 2.四氢呋喃(THF) | 选项2：使用10%~90% B的梯度，其中：A = 0.1%三氟乙酸(TFA)水溶液，B = 0.1%三氟乙酸(TFA)乙腈(CH3CN)溶液 |
| 3.四氢呋喃(THF) | 3.二氯甲烷 | |
| 4.甲醇 | 4.正己烷 | |
| 5.水 | 5.异丙醇(然后使用适当比例的异丙醇/水混合溶液** ) | 选项3：使用7 M盐酸胍或7 M尿素冲洗色谱柱 |
| 6.流动相 | 6.流动相 |
* 在使用THF或正己烷之前，确保系统与这些溶剂兼容。只有在利用纯反相有机溶剂（如乙腈）无法清洗色谱柱时，方可考虑使用诸如THF或正己烷之类的溶剂。降低流速，使用较低的操作温度并尽量减少系统与THF和/或正己烷的接触。
** 使用低有机溶剂含量的溶液，以避免出现缓冲盐析出。
b. 存放
如果反相色谱柱需要在室温下存放超过四天，应将其保存于100%乙腈中。对于高温应用，请在使用后立即使用100%乙腈保存色谱柱，以便尽可能延长色谱柱使用寿命。切勿使用
缓冲盐保存色谱柱。如果流动相中含有缓冲盐，则先用10倍柱体积（常规色谱柱体积请参见表1）的HPLC级水冲洗反相ACQUITY BEH色谱柱，再用100%乙腈替换柱内的水，然后
储存。如果不执行这个中间步骤，在引入100%乙腈时，色谱柱内可能会出现缓冲盐析出。BEH Amide色谱柱在保存100%乙腈前先进行梯度冲洗至100%乙腈以将所有水相溶剂从柱中冲洗干净。将色谱柱完quan密封，防止柱床因溶剂蒸发而变干。
如果BEH HILIC色谱柱需要存放超过四天，应将其保存于95:5乙腈:水中。切勿使用缓冲液保存色谱柱。如果流动相中含有缓冲盐，则用10倍柱体积的95:5乙腈:水冲洗色谱柱（常规
色谱柱体积请参见表1）。
注：如果色谱柱运行了含甲酸盐（如甲酸铵、甲酸等）的流动相，并且之后使用100%乙腈进行冲洗，那么在重新安装色谱柱并再次运行含甲酸盐的流动相时，柱平衡花费的时间可能略长。