Waters Styragel色谱柱的保养和维护

本章介绍了：

■ 故障排查

■ 色谱柱保存

■ 效率测试

a.故障排查

表3描述了具体问题、原因和纠正措施。

表3. 色谱柱故障排查。

b. 色谱柱保存

如果您打算在24小时内再次使用色谱柱，则无需进行特殊的保存。但是，应确保色谱柱不得变干。如果储存时间较长，请将色谱柱放回其包装盒中，并塞紧端塞进行储存。在没有溶剂流动的情况下，请勿将色谱柱置于高温环境中。

为获得最长的色谱柱寿命，应避免温度循环变化。色谱柱未使用时，应维持在运行温度，并将流速降低至0.1 mL/min。

要重启色谱柱，将流速维持在0.1 mL/min，并且（如果适用）在10小时内将温度逐渐升高。然后将流速设置为所需的操作流速。

c. 效率测试

沃特世色谱柱经过测试，符合我们的指标。柱效随下列条件不同可能略有变动：

■ 所用设备的类型和条件

■ 样品性质

■ 仪器设置

执行效率测试。为了测试系统及系统中的每根色谱柱，须执行以下两种测试：

■ 仪器谱带展宽测试

■ 柱效测试

何时执行效率测试

每次增加色谱柱或改动系统时均需执行效率测试。在系统使用过程中，应定期执行效率测试。

如果正常操作色谱柱的过程中发生问题，请重复初始效率测试的步骤并对比结果。在非串联条件下执行柱效测试，可用于监测仪器谱带展宽现象。谱带展宽过大的问题需在色谱柱安装之前得到解决。

1）测试仪器谱带展宽

测试步骤

合理操作的系统的谱带展宽应当小于150 μL（对于溶剂高效色谱柱，谱带展宽应小于75 μL）。测定系统谱带展宽的方法：

1. 从系统中取出色谱柱。

2. 用零死体积接头连接入口与出口管件。

3. 将流速设置为1.0 mL/min。

4. 使用较快的纸速可获得易于测量峰宽的色谱峰。如果使用的是数据系统，请将采样速率设置为每秒至少10个数据点。用户可能需要调节检测器灵敏度以保持色谱峰以合适的尺寸显示。

5. 注入与塔板数测定分析相同的样品（见表4、5和6）。

6. 在所得峰的4.4%峰高处测量峰宽，以获得μL值。

图5显示了5 sigma方法，其中峰宽（w）在峰高（h）的4.4%处测得。

2）柱效测试

下文列出的柱效测试步骤可用于计算理论塔板数，该参数是衡量系统色谱柱效率的指标。

溶剂无需使用色谱柱出厂溶剂测定色谱柱的效率。使用不同的溶剂时，测得的初始塔板数将会不同。请使用常规操作溶剂分别测试色谱柱。

测试步骤

柱效测试的方法：

1. 对于HR 0.5、HR 1、HR 2和HR 4E色谱柱，将流速缓慢增至1.0 mL/min；对于所有其它色谱柱，将流速增至2.0 mL/min。

2. 适当调节检测器衰减，使色谱峰达到全尺寸的70%（噪音水平小于全尺寸的0.5%）。

3. 将记录仪纸速设置为50 mm/min，或将数据系统采集速率设置为每秒至少5个数据点。

4. 标记溶液的进样体积最高为20 μL。溶液标记物最高浓度为10%。对于溶剂高效色谱柱，进样体积最多5 μL溶液。

关于执行效率测试时所用的标记物，请参阅表4、表5或表6。

5. 记录保留时间、仪器设置和色谱柱配置，以便将来校准时可以准确重复各项条件。

6. 采用正切法计算塔板数（见图6）。利用这些结果对色谱柱整个寿命期内的性能进行比较。

7. 当任何色谱柱的塔板数低于初始值30%以上时，应更换色谱柱。